福建地区慢性乙肝患者HBV聚合酶区rtM204和rtN236位点自然变异株调查分析
发布时间：2021-08-14 06:53
目的1..检测HBV rtM204位点的自然变异株在慢性乙型肝炎轻度、中度、重度组、肝硬化组中发生的频率,探讨分析rtM204位点（YMDD）自然变异的临床意义。2.检测HBV rtN236位点的自然变异株在慢性乙型肝炎轻度、中度、重度组以及肝硬化组中发生的频率,探讨该自然变异株与不同慢性肝病类型的关系。方法1.应用引物特异性实时荧光定量PCR的方法检测患者拉米夫定rtM204V/I突变。2.应用巢式聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术（ntPCR-RFLP）检测乙型肝炎病毒阿德福韦酯rtN236T位点突变。结果1.在250例未使用抗病毒药物治疗的慢性乙肝患者中,拉米夫定rtM204V/I位点突变例（2%）,其中1例为YIDD阳性,2例为YVDD阳性,2例为YIDD、YVDD混合型。未使用抗病毒药物慢性乙肝患者乙肝基因分型C亚型占56.40%（141/250）,B亚型占43.60%（109/250）。rtM204V/I变异与未变异组在慢性乙型肝炎临床分型（包括慢性轻度、中度、重度、乙肝肝硬化）中的分布无显著性差异。患者HBV基因分型、性别、HBeAg状态、HBV DNA水平、AL...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HBV-DNArtN236T位点目的基因的扩增产物
图 1b: HBV-DNA rtN236T 位点目的基因的扩增产物图 1b 中左起第一孔为为对照（C），左起第二至十孔为样本孔（S1-S10），样本孔分子量 300bp 左右，未被酶切为 304bp，被酶切则为 285bp，变异株为 S2 及S9。2.4 HBV RT 区基因序列测定通过巢式 PCR 引物扩增 RT 区，目标测序范围约为 aa170-aa250。扩增纯化后，通过 Sanger 双脱氧法在 ABI3770 测序仪（购自美国 ABI 公司）进4 份血清标本中均检出 rtN236T 变异。经 HBVDNA 测序证实，患者 HBV 基因组位碱基由腺嘌呤(A)突变为胞嘧啶(C)，从而导致 HBV 聚合酶 D 区 a236 氨基冬酰胺(asparagine，N)变异为苏氨酸(threonine，T)。HBV RT 区基因序列果与 RFLP 分析结果一致。其中一个病人的部分测序截图如下图(图 2):
图 1b: HBV-DNA rtN236T 位点目的基因的扩增产物图 1b 中左起第一孔为为对照（C），左起第二至十孔为样本孔（S1-S1孔分子量 300bp 左右，未被酶切为 304bp，被酶切则为 285bp，变异株S9。2.4 HBV RT 区基因序列测定通过巢式 PCR 引物扩增 RT 区，目标测序范围约为 aa170-aa化后，通过 Sanger 双脱氧法在 ABI3770 测序仪（购自美国 ABI 份血清标本中均检出 rtN236T 变异。经 HBVDNA 测序证实，患者 H碱基由腺嘌呤(A)突变为胞嘧啶(C)，从而导致 HBV 聚合酶 D 区 酰胺(asparagine，N)变异为苏氨酸(threonine，T)。HBV RT 区与 RFLP 分析结果一致。其中一个病人的部分测序截图如下图(
【参考文献】：
期刊论文
[1]拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒YMDD变异的相关因素分析[J]. 曹新鲜,李佳,邱隆敏,罗亚文,陈应华,冉燕. 中华肝脏病杂志. 2009 (09)
[2]福州市乙肝病毒基因型和基因亚型的分布及其与前C、C基因启动子变异的关系[J]. 郭燕,郑能雄,姚栩,纪惠玲,陈智伟,陈艳,徐珊,张彩云,黄晓霞,杨建娜,卢园. 中国病原生物学杂志. 2008(10)
[3]未经抗病毒治疗的HBV P基因YMDD基因序列变异及与基因型的关系[J]. 陈乃玲,赵绍林,刘晓彬,韦玉芳,吴惠毅,赵文海. 中华临床医师杂志(电子版). 2008(10)
[4]拉米夫定耐药者乙肝病毒P基因区的突变分析[J]. 何煦,江南. 四川大学学报(医学版). 2007(05)
[5]乙型肝炎病毒基因YMDD自然变异的检测及意义[J]. 郑南红,纪礽斌,周文红,应豪,胡家定,丁世雄,舒晋峰. 临床肝胆病杂志. 2007(03)
[6]苦参素联合单磷酸阿糖腺苷治疗慢性乙型肝炎YMDD变异临床研究[J]. 顾小军,马明,孙薇薇,李定坤. 实用临床医药杂志. 2007(05)
[7]Comparison of amplicon-sequencing, pyrosequencing and real-time PCR for detection of YMDD mutants in patients with chronic hepatitis B[J]. Zhi-Jun Yang, Mei-Zeng Tu, Management School, Shangha Jiaotong University, Shanghai 200052, China Jian Liu, Laboratory Center, First Hospital of Yangzhou Yangzhou 225001, Jiangsu Province, China Xiao-Ling Wang, Laboratory Center, Subei People’s Hospital Yangzhou 225001, Jiangsu Province, China Hong-Zhi Jin, School of Life Science, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200240, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(44)
[8]YMDD自然变异毒株流行病学调查[J]. 霍红,赵书民,蔡雄,缪晓辉. 肝脏. 2006(04)
[9]未经拉米夫定治疗HBVYMDD变异的临床分析[J]. 区映研,卫建均,曾文铤,朱科伦,马佩球. 热带医学杂志. 2006(07)
[10]应用巢式聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术检测乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异-rtN236T变异[J]. 闫杰,谢雯,王磊,冯鑫,宋淑静,王晶波,刘顺爱,魏红山. 胃肠病学和肝病学杂志. 2006(03)
本文编号：3341997
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HBV-DNArtN236T位点目的基因的扩增产物
图 1b: HBV-DNA rtN236T 位点目的基因的扩增产物图 1b 中左起第一孔为为对照（C），左起第二至十孔为样本孔（S1-S10），样本孔分子量 300bp 左右，未被酶切为 304bp，被酶切则为 285bp，变异株为 S2 及S9。2.4 HBV RT 区基因序列测定通过巢式 PCR 引物扩增 RT 区，目标测序范围约为 aa170-aa250。扩增纯化后，通过 Sanger 双脱氧法在 ABI3770 测序仪（购自美国 ABI 公司）进4 份血清标本中均检出 rtN236T 变异。经 HBVDNA 测序证实，患者 HBV 基因组位碱基由腺嘌呤(A)突变为胞嘧啶(C)，从而导致 HBV 聚合酶 D 区 a236 氨基冬酰胺(asparagine，N)变异为苏氨酸(threonine，T)。HBV RT 区基因序列果与 RFLP 分析结果一致。其中一个病人的部分测序截图如下图(图 2):
图 1b: HBV-DNA rtN236T 位点目的基因的扩增产物图 1b 中左起第一孔为为对照（C），左起第二至十孔为样本孔（S1-S1孔分子量 300bp 左右，未被酶切为 304bp，被酶切则为 285bp，变异株S9。2.4 HBV RT 区基因序列测定通过巢式 PCR 引物扩增 RT 区，目标测序范围约为 aa170-aa化后，通过 Sanger 双脱氧法在 ABI3770 测序仪（购自美国 ABI 份血清标本中均检出 rtN236T 变异。经 HBVDNA 测序证实，患者 H碱基由腺嘌呤(A)突变为胞嘧啶(C)，从而导致 HBV 聚合酶 D 区 酰胺(asparagine，N)变异为苏氨酸(threonine，T)。HBV RT 区与 RFLP 分析结果一致。其中一个病人的部分测序截图如下图(
【参考文献】：
期刊论文
[1]拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒YMDD变异的相关因素分析[J]. 曹新鲜,李佳,邱隆敏,罗亚文,陈应华,冉燕. 中华肝脏病杂志. 2009 (09)
[2]福州市乙肝病毒基因型和基因亚型的分布及其与前C、C基因启动子变异的关系[J]. 郭燕,郑能雄,姚栩,纪惠玲,陈智伟,陈艳,徐珊,张彩云,黄晓霞,杨建娜,卢园. 中国病原生物学杂志. 2008(10)
[3]未经抗病毒治疗的HBV P基因YMDD基因序列变异及与基因型的关系[J]. 陈乃玲,赵绍林,刘晓彬,韦玉芳,吴惠毅,赵文海. 中华临床医师杂志(电子版). 2008(10)
[4]拉米夫定耐药者乙肝病毒P基因区的突变分析[J]. 何煦,江南. 四川大学学报(医学版). 2007(05)
[5]乙型肝炎病毒基因YMDD自然变异的检测及意义[J]. 郑南红,纪礽斌,周文红,应豪,胡家定,丁世雄,舒晋峰. 临床肝胆病杂志. 2007(03)
[6]苦参素联合单磷酸阿糖腺苷治疗慢性乙型肝炎YMDD变异临床研究[J]. 顾小军,马明,孙薇薇,李定坤. 实用临床医药杂志. 2007(05)
[7]Comparison of amplicon-sequencing, pyrosequencing and real-time PCR for detection of YMDD mutants in patients with chronic hepatitis B[J]. Zhi-Jun Yang, Mei-Zeng Tu, Management School, Shangha Jiaotong University, Shanghai 200052, China Jian Liu, Laboratory Center, First Hospital of Yangzhou Yangzhou 225001, Jiangsu Province, China Xiao-Ling Wang, Laboratory Center, Subei People’s Hospital Yangzhou 225001, Jiangsu Province, China Hong-Zhi Jin, School of Life Science, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200240, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(44)
[8]YMDD自然变异毒株流行病学调查[J]. 霍红,赵书民,蔡雄,缪晓辉. 肝脏. 2006(04)
[9]未经拉米夫定治疗HBVYMDD变异的临床分析[J]. 区映研,卫建均,曾文铤,朱科伦,马佩球. 热带医学杂志. 2006(07)
[10]应用巢式聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术检测乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异-rtN236T变异[J]. 闫杰,谢雯,王磊,冯鑫,宋淑静,王晶波,刘顺爱,魏红山. 胃肠病学和肝病学杂志. 2006(03)
本文编号：3341997
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