可溶性表氧化物水解酶在高同型半胱氨酸血症诱导小鼠肝脏脂肪变性中的作用研究
发布时间：2021-08-15 07:36
非酒精性脂肪性肝脏疾病（Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是由非酒精因素引起的一种慢性肝脏疾病,其主要特征是脂质在肝脏中发生异常积累,并且出现多种组织学的病理变化,如肝脏组织的脂肪变,非酒精性脂肪性肝炎,肝脏纤维化,肝硬化甚至会进一步发展为肝癌。近年来许多关于NAFLD的研究发现II型糖尿病,高血脂,肥胖等背景与脂肪肝有很大程度上的联系。同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）是蛋氨酸在体内由肝脏代谢所产生的具有多种生物学功能的含硫氨基酸。目前将血浆内的Hcy含量过高（≥15μM）定义为高同型半胱氨酸血症（Hyperhomocysteinemia,HHcy）。许多与代谢相关的疾病、心血管疾病和免疫性疾病的发生都与HHcy密切相关。临床研究显示,血浆中Hcy的含量水平与NAFLD的发生呈正相关关系。可溶性表氧化物水解酶（Soluble Epoxide Hydrolase,sEH）是花生四烯酸（Arachidonic acid,AA）细胞色素P450代谢通路中的关键酶,可将表氧-二十碳三烯酸（Epoxyeicosatrienoic aci...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HMD喂养增加了小鼠肝脏脂质沉积取HMD喂养和正常饮食喂养小鼠肝脏，进行冰冻切片
图 2. HMD 喂养小鼠肝脏中 sEH 的表达和活性提取不同饮食喂养小鼠肝脏组织的 mRNA 和蛋白, 检测肝脏组织 sEH 的表达以及活。(A) Western blot 检测 sEH 蛋白表达情况；(B) qRT-PCR 检测 sEH mRNA 表达情况 LC/MS-MS 质谱检测 EETs 与 DHETs 的比值表示 sEH 的相对活性；(Means±SEM, *p5, Means±SEM,**p <0.01, n≥6)2 HHcy 通过增加 sEH 活性降低了肝脏内 EET 的水平sEH 最主要的生物学功能是将花生四烯酸通过细胞色素 P450 通路代谢的 EET 同分异构体（5,6-；8,9-；11,12- 和 14,15-EET）代谢为无活性的代谢，通过上述结果可知，HHcy 上调了肝脏组织 sEH 的表达。进一步的检测结现 HHcy 组小鼠肝脏 sEH 的活性亦明显增加。为了明确 sEH 活性的改变是响了肝脏内 EET 的水平，我们利用液相色谱-串联质谱法（LC/MS-MS）检脏组织中花生四烯酸代谢产物 EET 的含量，结果显示 HHcy 小鼠肝脏组,12-EET 的含量显著降低，其他三种 EET 含量无明显变化。在机体内，EET
22图 3. 肝脏组织中 EET 的代谢及含量(A) 花生四烯酸的细胞色素 P450 途径代谢示意图 ; (B) 液相色谱 - 串联质谱法(LC/MS-MS)检测肝脏组织中花生四烯酸代谢产物 EET 的含量; (C)检测参与 EET 合成代谢关键酶的表达；(Means±SEM, *p < 0.05, n≥6)1.3 Hcy 通过增加 sEH 的活性促进了肝细胞的脂质沉积上述在体实验结果表明，在 HHcy 引起的肝脏脂肪变性中，sEH 蛋白有着重要的作用。那么Hcy与肝细胞脂质沉积和sEH表达和活性之间是否存在联系? 分离小鼠原代肝细胞进行培养，细胞贴壁 6h 后给予 Hcy（100μM）处理，对肝细胞进行油红 O 染色，发现 Hcy 处理组中肝细胞的脂滴聚集相对于对照组明显增多。mRNA 和蛋白检测结果显示 Hcy 增加了肝细胞 sEH 的表达和活性。进一步
【参考文献】：
期刊论文
[1]Genetic and epigenetic variants influencing the development of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Yu-Yuan Li. World Journal of Gastroenterology. 2012(45)
[2]Animal models of nonalcoholic fatty liver disease/nonalcoholic steatohepatitis[J]. Yoshihisa Takahashi,Yurie Soejima,Toshio Fukusato. World Journal of Gastroenterology. 2012(19)
[3]Histopathology of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Elizabeth M Brunt,Dina G Tiniakos. World Journal of Gastroenterology. 2010(42)
本文编号：3344110
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HMD喂养增加了小鼠肝脏脂质沉积取HMD喂养和正常饮食喂养小鼠肝脏，进行冰冻切片
图 2. HMD 喂养小鼠肝脏中 sEH 的表达和活性提取不同饮食喂养小鼠肝脏组织的 mRNA 和蛋白, 检测肝脏组织 sEH 的表达以及活。(A) Western blot 检测 sEH 蛋白表达情况；(B) qRT-PCR 检测 sEH mRNA 表达情况 LC/MS-MS 质谱检测 EETs 与 DHETs 的比值表示 sEH 的相对活性；(Means±SEM, *p5, Means±SEM,**p <0.01, n≥6)2 HHcy 通过增加 sEH 活性降低了肝脏内 EET 的水平sEH 最主要的生物学功能是将花生四烯酸通过细胞色素 P450 通路代谢的 EET 同分异构体（5,6-；8,9-；11,12- 和 14,15-EET）代谢为无活性的代谢，通过上述结果可知，HHcy 上调了肝脏组织 sEH 的表达。进一步的检测结现 HHcy 组小鼠肝脏 sEH 的活性亦明显增加。为了明确 sEH 活性的改变是响了肝脏内 EET 的水平，我们利用液相色谱-串联质谱法（LC/MS-MS）检脏组织中花生四烯酸代谢产物 EET 的含量，结果显示 HHcy 小鼠肝脏组,12-EET 的含量显著降低，其他三种 EET 含量无明显变化。在机体内，EET
22图 3. 肝脏组织中 EET 的代谢及含量(A) 花生四烯酸的细胞色素 P450 途径代谢示意图 ; (B) 液相色谱 - 串联质谱法(LC/MS-MS)检测肝脏组织中花生四烯酸代谢产物 EET 的含量; (C)检测参与 EET 合成代谢关键酶的表达；(Means±SEM, *p < 0.05, n≥6)1.3 Hcy 通过增加 sEH 的活性促进了肝细胞的脂质沉积上述在体实验结果表明，在 HHcy 引起的肝脏脂肪变性中，sEH 蛋白有着重要的作用。那么Hcy与肝细胞脂质沉积和sEH表达和活性之间是否存在联系? 分离小鼠原代肝细胞进行培养，细胞贴壁 6h 后给予 Hcy（100μM）处理，对肝细胞进行油红 O 染色，发现 Hcy 处理组中肝细胞的脂滴聚集相对于对照组明显增多。mRNA 和蛋白检测结果显示 Hcy 增加了肝细胞 sEH 的表达和活性。进一步
【参考文献】：
期刊论文
[1]Genetic and epigenetic variants influencing the development of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Yu-Yuan Li. World Journal of Gastroenterology. 2012(45)
[2]Animal models of nonalcoholic fatty liver disease/nonalcoholic steatohepatitis[J]. Yoshihisa Takahashi,Yurie Soejima,Toshio Fukusato. World Journal of Gastroenterology. 2012(19)
[3]Histopathology of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Elizabeth M Brunt,Dina G Tiniakos. World Journal of Gastroenterology. 2010(42)
本文编号：3344110
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