HBV核心区启动子反义真核表达载体的构建

发布时间：2021-08-17 04:37

　　背景HBV感染是一个严重威胁到人类健康的全球性问题,HBV是引起急慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞肝癌的重要致病因素。抗病毒治疗是目前慢性乙型肝炎的关键性治疗措施,现有的抗病毒药物干扰素-α和核苷类似物的疗效有限,基因治疗日益成为目前的研究热点之一。基因治疗的关键在于选择良好的转基因载体、合适的目的基因和实现目的基因的可控性表达。基因工程中应用最多的载体是真核细胞表达载体,如病毒类载体,它们能将目的基因导入宿主细胞并稳定表达。本实验选择真核表达载体pEGFP-C1,为在细胞水平和体内观察其抑制HBV复制效果打下基础,同时选择HBV core启动子（core promoter, cp）作为目的基因（因为该启动子指导HBV pgRNA和pc mRNA转录的正确启动）,构建HBV cp的反义真核表达载体,该载体可以转录出cp的反义RNA,反义RNA与pgRNA中的cp部分结合有可能使pg RNA逆转录为负链DNA受阻,同时可能导致pg RNA翻译蛋白的水平下降,从而使HBV合成和包装下降,最终有可能使HBV的复制长期受到抑制。目的HBV核心区启动子的克隆及其反义真核表达载体的构建,为乙型肝炎的... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

真核表达载体pEGFP一CI结构图

图2HBV核心区启动子PCR扩增产物1:MarkerDL20002和3均为PCR产物NA聚合酶PCR扩增HBV核心区启动子A聚合酶进行PCR扩增得到的产物经1.0%琼脂糖凝胶现在225bp处出现一清晰的特异性条带，表明与HBv相同，见图3。

图3HBV核心区启动子PCR扩增产物1和2均为PCR产物3:MarkerDL2000粒pEGFp一Cl一cp的鉴定粒pEGFp一CI一ep的pCR鉴定重组质粒pEGFP一Cl一cP和空质粒pEGFP一CI为模板进脂糖凝胶电泳，以重组质粒pEGFP一Cl一cP为模板扩一增粒pEGFP一Cl为模板扩一增无此条带，结果见图4。


本文编号：3347072