MicroRNA-203通过靶向Lipin1抑制酒精性脂肪肝中肝细胞脂质异常代谢

发布时间：2021-08-22 08:24

　　目的酒精性肝病（Alcohol liver disease,ALD）是一类影响人类健康的全球性肝脏疾病,它包括酒精性肝炎（Alcohol hepatitis,AH）,酒精性脂肪肝（Alcohol fatty liver,AFL）,酒精性肝纤维化和肝硬化。大量饮酒是导致酒精性肝病的最主要原因。酒精性脂肪肝是酒精性肝病的早期阶段,它伴随着肝细胞大量的脂质积累以及肝细胞的氧化应激。因此有效的逆转酒精性脂肪肝是防止酒精性肝病恶化的重要措施。目前对于酒精性脂肪肝仍缺少有效的治疗药物和方法,阐明酒精性脂肪肝形成的相关分子机制对减少酒精性脂肪肝和酒精性肝病的发生具有重要意义。MicroRNA-203（miR-203）作为肿瘤抑制因子,它能够抑制肝细胞的增殖和迁移进而抑制肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发生和发展。本课题组前期通过收集酒精肝病人和正常人血液提取RNA高通量筛查对比发现,miR-203表达在酒精肝病人中降低,但其在酒精性脂肪肝中的作用和机制尚不清楚且亟待研究。Lipin1是Lipin家族的重要一员,它具有Lipin家族共有的调控功能。一方面它能够促进... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

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1.引言
2.实验材料
    2.1 动物
    2.2 实验细胞
    2.3 药品与试剂
    2.4 仪器与设备
    2.5 溶液和试剂的配制
    2.6 图像分析软件
3.实验方法
    3.1 酒精性脂肪肝模型建立
    3.2 肝脏组织 HE 染色
    3.3 肝脏组织油红染色
    3.4 肝脏免疫组化
    3.5 慢病毒过表达miR-203载体构造及体内感染
    3.6 血清 ALT，AST，TG，TCH 测定
    3.7 细胞培养
    3.8 MTT发测定细胞增殖
    3.9 细胞内油红染色
    3.10 细胞免疫荧光
    3.11 AML-12细胞总蛋白提取
    3.12 细胞核蛋白提取
    3.13 Westernblot
    3.14 实时定量PCR
    3.15 双荧光素酶报告实验
4.实验结果
    4.1 miR-203在酒精性脂肪肝模型中的表达
        4.1.1 酒精性脂肪肝模型的建立和病理变化
        4.1.2 miR-203在小鼠酒精性肝脏组织和酒精刺激的 AML-12 细胞中的表达
    4.2 体内慢病毒载体过表达miR-203对小鼠肝脏脂质代谢的影响
        4.2.1 体内过表达miR-203模型的建立和验证
        4.2.2 过表达miR-203对小鼠肝脏脂质代谢的影响
    4.3 体外过表达miR-203对AML-12脂质代谢的影响
        4.3.1 体外过表达miR-203模型的建立及验证
        4.3.2 过表达 mi R-203 对 AML-12 细胞内脂质代谢的影响
    4.4 miR-203能够靶向调控 LPIN1
    4.5 Lipin1在酒精性脂肪肝中的表达
        4.5.1 Lipin1在酒精性脂肪肝小鼠肝脏中的表达
        4.5.2 Lipin1在酒精刺激的AML-12细胞中的表达
    4.6 沉默Lipin1对AML-12细胞脂质代谢的影响
        4.6.1 si-RNA沉默AML-12细胞中内源性Lipin1的表达
        4.6.2 沉默Lipin1抑制了肝细胞的脂质积累
    4.7 miR-203对Lipin1亚细胞定位的调节作用
5.讨论
6.结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]Adult mouse model of early hepatocellular carcinoma promoted by alcoholic liver disease[J]. Aditya Ambade,Abhishek Satishchandran,Benedek Gyongyosi,Patrick Lowe,Gyongyi Szabo.  World Journal of Gastroenterology. 2016(16)



本文编号：3357384