HMGB1-Abox对SW480和THP-1细胞LPS/TLR4信号通路的影响

发布时间：2021-08-25 01:14

　　目的：观察HMGB1-Abox高表达对肠上皮细胞株SW480和单核细胞株THP-1中LPS/TLR4的影响，为以HMGB1-Abox为靶点治疗IBD提供理论和实验依据。方法：㈠LPS对SW480细胞HMGB1表达的影响实验分组如下：①对照组：SW480+0ng/ml LPS；②实验组1：SW480+100ng/ml LPS；③实验组2：SW480+1000ng/ml LPS；④实验组3：SW480+10000ng/ml LPS；培养SW480细胞至对数生长期，给予不同浓度LPS分别作用12h、24h收集细胞检测HMGB1的表达（重复3次）。㈡构建和鉴定HMGB1-Abox高表达细胞株⑴HMGB1-Abox重组真核质粒的构建及鉴定①在GeneBank中查找人HMGB1-A box基因序列，由公司基因合成。②将合成的HMGB1-A box基因插入到pEGFP-N1载体，构建重组质粒。扩增及提取重组质粒，鉴定方法采用酶切和测序。⑵HMGB1-Abox重组真核质粒在SW480细胞内的表达采用阳脂质体转染技术将pEGFP-N1-HMGB1-A box转染SW480细胞，分别观察有无绿色荧光及荧光... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 材料与方法
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 质粒
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 主要溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 筛选 HMGB1-A box 低表达肠上皮细胞株
        2.2.2 构建和鉴定 HMGB1-A box 高表达肠上皮细胞株
        2.2.3 HMGB1-A box 高表达及 EP 对 SW480 细胞 HMGB1、TLR4、MyD88 及 pNF-κB p65 及促炎因子分泌的影响
        2.2.4 EP 及 HMGB1-A box 高表达 SW480 细胞与 THP-1 细胞共培养对THP-1 细胞 HMGB1、LPS/TLR4 信号通路及促炎因子分泌的影响
    2.3 统计学处理
第3章 结果
    3.1 筛选 HMGB1-A box 低表达肠上皮细胞株
    3.2 LPS 对 SW480 细胞内 HMGB1 mRNA 表达的影响
    3.3 构建 HMGB1-A box 高表达 SW480 细胞
        3.3.1 重组 pEGFP-N1-HMGB1-A box 质粒的鉴定
        3.3.2 重组 HMGB1-Abox 真核质粒在 SW480 细胞内的表达
    3.4 EP 和 HMGB1-A box 高表达对 SW480 细胞 HMGB1 、TLR4/LPS 信号通路及促炎因子分泌的影响
        3.4.1 EP 和 HMGB1-A box 高表达对 SW480 细胞内 HMGB1 mRNA 及蛋白表达的影响
        3.4.2 EP 和 HMGB1-Abox 高表达对 SW480 细胞内 TLR4 mRNA 及蛋白表达的影响
        3.4.3 EP 和 HMGB1-A box 高表达对 SW480 细胞内 MyD88 mRNA 及蛋白表达的影响
        3.4.4 EP和HMGB1-Abox高表达对SW480细胞内pNF-κB p65蛋白表达的影响
        3.4.5 EP 和 HMGB1-Abox 高表达对 SW480 细胞分泌 HMGB1、IL-1β、TNF-α和 IL-6 的影响
    3.5 EP 及 A-box 高表达 SW480 细胞与 THP-1 细胞共培养对 THP-1 细胞内HMGB1、TLR4/LPS 信号通路及促炎因子分泌的影响
        3.5.1 EP 及 A-box 高表达 SW480 细胞与 THP-1 细胞共培养对 THP-1 细胞内 HMGB1 mRNA 及蛋白表达的影响
        3.5.2 EP 及 A-box 高表达 SW480 细胞与 THP-1 细胞共培养对 THP-1 细胞内 TLR4 mRNA 及蛋白表达的影响
        3.5.3 EP 及 A-box 高表达 SW480 细胞与 THP-1 细胞共培养对 THP-1 细胞内 MyD88 mRNA 及蛋白表达的影响
        3.5.4 EP 及 A-box 高表达 SW480 细胞与 THP-1 细胞共培养对 THP-1 细胞 pNF-κB p65 蛋白表达的影响
        3.5.5 EP 及 A-box 高表达 SW480 细胞与 THP-1 细胞共培养对 THP-1 细胞分泌 HMGB1、IL-1β、TNF-α和 IL-6 的影响
第4章 讨论
    4.1 LPS 对 SW480 细胞及 THP-1 细胞内 TLR4 信号通路的影响
    4.2 LPS 对 SW480 细胞及 THP-1 细胞 HMGB1 表达和分泌的影响
    4.3 HMGB1-A box 高表达对 SW480 细胞及 THP-1 细胞内 LPS/TLR4 信号通路和促炎因子的影响
    4.4 EP 对 SW480 细胞及 THP-1 细胞内 LPS/TLR4 信号通路和促炎因子的影响
第5章 结论
致谢
参考文献
综述
    参考文献



本文编号：3361093