大鼠肝脏撞击伤后肝组织自噬相关蛋白及miRNA的表达

发布时间：2021-09-22 00:17

　　第一部分:生物信息学分析自噬相关蛋白LC3、Beclin1调控的miRNAs调控网络目的:分析自噬相关蛋白LC3、Beclin1调控的miRNAs调控网络方法:本文通过运用多种生物信息学软件及数据库,确定自噬基因,并探索其相关调控的miRNAs关系,理清这些miRNAs与其上游的转录因子、下游靶基因存在的反馈和前馈通路,以更好理解miRNAs在自噬发生过程中的作用机制,并为下一步实验验证其分子调控网络机制提供线索。结果:通过Pubmed数据库筛选得LC3和Beclin1两个自噬相关基因作为研究对象。利用miRWalk软件分别预测得与LC3相互作用的miRNA共1191个,其中99个miRNA为4个预测软件共同预测所得,从中的10个miRNA与自噬相关;Beclin1与2132个miRNA存在结合位点,其中114个miRNA为4个预测软件共同预测所得,从中17个miRNA参与自噬过程。经文献报道数量比对后,LC3选取miR-140-3p、miR-214-3p和mi R-301a-5p作为候选靶miRNA;Beclin1的靶miRNA为miR-124-3p、miR-21-3p和mi R-3... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：博士

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克隆psiCHECK-2-WT-Beclin1-3'UTR荧光活性的比较(P*<0.05comparedwithblankandNCgroups).(C):克隆psiCHECK-2-mut-Beclin1-3'UTR荧光活性的比较(P*>0.05与空

42Figure 4. miR-140-3p 靶向调控 LC3 (A): 一种含有 LC3 的 3’UTR 基因和突变的3'UTR 荧光素酶报告基因载体结构示意图. (B): 克隆 psiCHECK-2- WT-LC3-3' UTR荧光活性的比较 (P*< 0.05 compared with blank and NC groups). (C): 克隆psiCHECK-2- mut-LC3 -3' UTR 荧光活性的比较 (P*> 0.05 与空白对照级和阴性组比较)2.3 miR-124-3p 负向调控 Beclin1,miR-140-3p 负向调控 LC3 的表达为了进一步探讨 miR-124-3p 与 Beclin1，miR-141-3p 与 LC3 存在何种调控关系。首先，运用 RT-PCR 检测了大鼠肝脏组织、正常肝细胞 BRL-3A 中 miR-140-3p.2 与miR-124-3p 相对表达水平。结果显示：miR-140-3p 与 miR-124-3p 在正常肝组织中的表达与钝性撞击伤后肝组织比较显著增高，同时，在正常肝细胞 BRL-3A 中也呈高表达（Fig5a;Fig5 b)。.进一步将一定浓度的 miR-140-3p 抑制剂，miR-124-3p 抑制剂分别转染正常肝细胞 BRL-3A 中 48 小时后，western-blotting 检测到 LC3、Beclin1 蛋白相 对 表 达 水 平 显 著 上 调 （ Fig5c;Fig5 d). 一 定 浓 度 的 miR-140-3p mimics ，miR-124-3pmimis 分别转染正常肝细胞 BRL-3A 中 48 小时后，western-blotting 检测


本文编号：3402775