HBeAg调节单个核细胞表面TLR2、TLR4和PD-1/PD-L1的表达以及细胞因子分泌

发布时间：2021-09-24 18:41

　　目的:HBV感染呈世界性流行,每年约有100万人死于慢性HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌（HCC）。目前研究显示HBeAg非HBV病毒结构蛋白,也不参与病毒复制,但其作为重要的调节免疫的功能蛋白在HBV慢性感染过程中作用越来越受到重视。Toll样受体（toll-like receptors,TLR）为模式识别受体（pattern recognition receptors,PRR）的重要成员,是机体免疫系统识别病原体,起动固有免疫和调节适应性免疫的重要分子。程序死亡因子（PD-1）/ PD-L1是免疫球蛋白超家族协同刺激分子的重要成员,参与机体免疫调节过程。本文拟通过观察HBeAg对人单核细胞株（THP-1）及人外周血单个核细胞（PBMC）细胞表面TLR2、TLR4、PD-1和PD-L1的受体和mRNA表达的影响,以及对细胞因子IL-2、4、6、10、17以及TNF-α和IFN-γ表达的影响,揭示HBeAg在HBV感染所致免疫耐受中的作用和地位,为阐明HBeAg的免疫调节机制以及HBV感染慢性化的免疫机制提供实验依据。方法:1.应用本实验室已经构建的pJW4303/HBe... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

质粒JW4303/HBe酶切鉴定结果

24图 2：质粒 pJW4303/HBe 测序结果1.2.人抗 HBe 血清阻断 HBeAg 的工作浓度确定收获 pJW4303/HBe 转染 293T 细胞上清，雅培检测 HBeAg，依照本实验既往确定的 HBeAg 66.71 S/CO 做为工作浓度；确定人抗 HBe 血清工作浓度采倍比稀释人抗 HBe 血清（1:5~1:1280）阻断 HBeAg 后，ELISA 检测 HBeAgHBeAb，结果显示阻断剂人抗 HBe 血清稀释比例≤ 1:80 时 HBeAg 均能被阻（图 3）。

图 3：人抗 HBe 血清阻断 HBeAg 工作浓度选择A 图为人抗 HBe 血清阻断 HBeAg 后 ELISA 检测 HBeAb，横坐标为血清稀释度，纵坐标为OD值, cutoff值为0.92，阳性为＜cutoff值。B图人抗HBe血清阻断HBeAg后ELISA检测 HBeAg，横坐标为血清稀释度，纵坐标为 OD 值，cutoff 值为 0.15，阳性为＞cutof值。图示 ●健康人血清+HBeAg：健康人抗 HBe 阴性血清阻断 HBeAg 上清；▲ 人抗HBe 血清+HBeAg：人抗 HBe 血清阻断 HBeAg 上清。2. HBeAg 对人 THP-1 细胞株的影响：2.1 HBeAg 对人 THP-1 细胞表面 TLR2、TLR4、PD-1 及 PD-L1 表达的影响加入 HBeAg 孵育后，CD14+的 THP-1 细胞表达 TLR2 （3.10%）和 TLR4（7.55%）与对照组相比 TLR2（6.31%）和 TLR4（17.84%）均下降（t=-1.964，p<0.05），但 PD-1、PD-L1 变化无统计学差异，应用人抗 HBe 血清阻断 HBeAg后 TLR2、TLR4 表达的没有明显上调（图 4）。由此显示 HBeAg 下调 CD14+的

【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型肝炎e抗原对外周血单核细胞Toll样受体2表达的影响[J]. 韩亚萍,李军,万玉峰,孔练花,蔡洁,董莉,刘源,陈念,黄祖瑚.  中华肝脏病杂志. 2008 (10)
[2]慢性乙型肝炎患者单核细胞来源树突状细胞Toll样受体7的表达低下[J]. 李军,韩亚萍,孔练花,刘源,陈念,董莉,黄祖瑚.  南京医科大学学报(自然科学版). 2007(09)



本文编号：3408251