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肠缺血再灌注条件下肾上腺髓质素对肠粘膜屏障功能的作用及机制研究

发布时间:2017-05-02 22:12

  本文关键词:肠缺血再灌注条件下肾上腺髓质素对肠粘膜屏障功能的作用及机制研究,由笔耕文化传播整理发布。


【摘要】:背景 肠粘膜表面由大量肠上皮细胞构成,在内、外环境之间形成了一个天然保护屏障,能抵御肠腔内的炎性因子、微生物等有害物质进入血液循环,这个屏障就称之为肠粘膜屏障,是机体防御系统的重要组成部分。肠缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusioninjury,I/R)发生在小肠移植、烧伤、出血、败血症等许多临床相关的病理过程中,能导致肠粘膜结构破坏和屏障功能受损,使肠道的通透性升高,进一步可引起肠源性感染,甚至发展为多器官功能障碍综合征,严重危及患者生命。因此,寻找新的有效途径来预防和治疗肠I/R的病人显得尤为必要。 肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)是一种血管舒张肽,最早在人的嗜铬细胞瘤中分离得到,其功能除了舒张血管还与增殖、凋亡关系密切。已有研究报道,AM能显著改善肠炎引起的肠屏障功能紊乱,在肠粘膜稳态的维持中发挥很重要的调控作用;而在肠I/R条件下,AM保护肠粘膜屏障已被认为与其下调肠道炎症因子密切相关[1],但是关于AM是否通过肠上皮间紧密连接来发挥作用进而影响屏障功能的文献报道尚少。因此,本课题的目的主要是研究在肠I/R条件下AM对肠粘膜屏障的作用及其可能存在的机制。 方法 1.建立肠上皮细胞株Caco-2缺氧模型以及加入AM1-52、AM22-52、CGRP8-37干预模型,用Transwell小室对肠上皮细胞进行培养和用电阻仪测定其跨上皮电阻(Transepithelial Resistance,TER),从而确定肠上皮细胞TER在缺氧及以上几种干预情况下的变化。 2.结合AM的受体阻断剂AM22-52、CGRP8-37,通过蛋白免疫印迹和激光共聚焦技术,,检测AM对肠上皮细胞中紧密连接蛋白的表达及结构的影响,从而确定AM1和AM2受体在AM调控肠上皮屏障功能中具体是哪个受体发挥主要的作用。 3.建立小鼠肠缺血再灌注(I/R)损伤模型,通过蛋白免疫印迹、Real-time PCR及Ussing chambers技术,检测小鼠肠粘膜中AM及其主要受体成分(CRLR、RAMP2、RAMP3)的表达变化和STAT1信号途径的激活情况;以及肠道粘膜TER在I/R和AM干预情况下的变化。 4.在上述的体内模型中,通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色的方法,检测肠粘膜形态结构在I/R和AM干预情况下的变化。 主要结果 1.缺氧引起肠上皮细胞TER值下降,而AM显著改善了缺氧引起的肠上皮屏障功能损害;与此同时,加入AM22-52能明显降低AM的保护作用,然而加入CGRP8-37对AM的作用影响不大。 2.单纯缺氧可引起肠上皮细胞中紧密连接蛋白Claudin-1表达下降,并且使其紧密连接的结构发生破坏,外源性AM作用于缺氧的Caco-2细胞,可以使Claudin-1蛋白表达重新上调,其紧密连接的结构破坏也减少;与此同时,加入AM22-52和CGRP8-37对AM的影响与上述对TER的作用趋势基本一致。 3.肠I/R条件下肠粘膜AM蛋白含量显著升高,术后6h达到最高值;伴随着肠粘膜STAT1丝氨酸残基磷酸化(p-STAT1(S727))水平也增高;同时引起CRLR、RAMP2mRNA水平显著升高,而RAMP3mRNA水平无明显变化。 4.肠I/R条件下肠粘膜中的紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1在蛋白水平和mRNA水平都降低,p-STAT1(S727)被异常激活,并引起肠道TER值下降,使通透性增高;AM干预处理后显著改善紧密连接蛋白表达的降低(除ZO-1mRNA水平无明显变化),使激活的p-STAT1(S727)被明显抑制,并使肠道TER值得到一定程度的升高。 5. HE染色镜下可见,I/R条件下肠粘膜中部分小肠绒毛上皮脱落,形态结构严重破坏;经AM预处理使得小肠绒毛重新排列整齐,显著缓解肠I/R所致的形态结构损害。 结论 I/R损伤后AM主要通过AM1(CRLR/RAMP2)受体对肠粘膜屏障起保护作用,通过调控肠上皮细胞间紧密连接蛋白的表达,从而维持肠粘膜屏障功能,其机制可能与抑制p-STAT1(S727)的激活有关。
【关键词】:肠粘膜屏障功能 肾上腺髓质素 肠缺血再灌注损伤 紧密连接蛋白 跨上皮电阻
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R574
【目录】:
  • 缩略语表4-5
  • Abstract5-7
  • 摘要7-9
  • 第一章 前言9-14
  • 1.1 选题缘由9-10
  • 1.2 研究背景10-12
  • 1.3 研究意义12-13
  • 1.4 研究内容13
  • 1.5 研究方法13-14
  • 第二章 缺氧条件下肾上腺髓质素及其受体对肠上皮屏障功能的作用14-34
  • 2.1 材料与方法15-27
  • 2.2 结果27-32
  • 2.3 讨论32-34
  • 第三章 AM 通过调控 STAT1 磷酸化在肠粘膜屏障功能中的作用及机制研究34-43
  • 3.1 材料与方法34-39
  • 3.2 结果39-41
  • 3.3 讨论41-43
  • 全文结论43-44
  • 参考文献44-49
  • 文献综述 肾上腺髓质素与炎症反应及缺血再灌注的研究进展49-64
  • 参考文献57-64
  • 硕士研究生期间撰写和发表的文章64-65
  • 致谢65

【参考文献】

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1 周静,王杉,叶颖江,杨q

本文编号:341788


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