乙型肝炎肝硬化患者骨髓间充质干细胞的分离培养及诱导分化为肝细胞样细胞的实验研究

发布时间：2021-10-07 19:18

　　骨髓中主要包含造血干细胞（hematopoietic stem cells，HSCs），间质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）和血管内皮前体细胞，近年研究表明还包含其它干细胞群，如生肌多能成体祖细胞（Multipotent adultprogenitor cells，MACP）。可以从不同组织分离的得到具有相似的生物学特性的间充质干细胞，包括脂肪组织，骨骼肌，胎儿肝脏和胰腺，脐血和羊水等。在适当的培养条件下MSCs具有自我更新和多向分化潜能，如：成骨细胞，心肌细胞，脂肪细胞，少突胶质细胞和神经元细胞等。同时MSCs具有抗增殖、抗炎活性、低免疫反应等特性，使其可以安全用于自体或异体移植，MSCs容易转染和易于冷冻保存。骨髓MSCs在细胞和组织工程中发挥重要作用，近年来在基础研究和临床实践骨髓来源的MSCs已引起人们极大的兴趣。乙型肝炎是全世界最常见的传染病之一。全世界大约有3.5亿慢性乙型肝炎病毒（HBV）携带者。乙型肝炎的治疗是非常有限的，而且HBV感染可能会导致肝硬化和肝癌。慢性肝损伤，肝细胞的再生能力丧失，从而导致肝脏无法维持其功能，这就是临床上所谓的... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
前言
中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
第1章 绪论
第2章 文献综述
    2.1 用于治疗肝脏疾病的干细胞来源
    2.2 间充质干细胞的生物学特性
        2.2.1 MSCs 的历史和特点
        2.2.2 MSCs 的来源
        2.2.3 骨髓 MSCs 的体外分离和纯化
        2.2.4 MSCs 的体外扩增培养
        2.2.5 MSCs 的表型特征
        2.2.6 MSCs 的可塑性
    2.3 MSCs 分化为肝细胞的实验研究
        2.3.1 MSCs 体外诱导分化为肝细胞
        2.3.2 MSCs 在体内分化为肝细胞
    2.4 MSCs 移植治疗肝脏疾病
        2.4.1 动物实验的研究结果
        2.4.2 临床研究结果
    2.5 MSCs 治疗肝脏疾病的可能机制
    2.6 MSCs 移植可能存在的问题和应用前景展望
第3章 乙型肝炎肝硬化患者骨髓间充质干细胞的生物学特性研究
    3.1 材料和方法
    3.2 方法
        3.2.1 肝硬化患者和健康供者骨髓 MSCs 的分离和培养
        3.2.2 骨髓 MSCs 的形态观察
        3.2.3 骨髓 MSCs 的生长曲线测定
        3.2.4 骨髓 MSCs 的体外定向诱导分化为脂肪细胞及鉴定
        3.2.5 骨髓 MSCs 体外定向诱导分化为成骨细胞及鉴定
        3.2.6 骨髓MSCs 的体外定向诱导分化为神经细胞及鉴定
        3.2.7 骨髓 MSCs 的细胞表型测定
        3.2.8 骨髓 MSCs 的细胞周期测定
        3.2.9 免疫组化法检测骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 表达
        3.2.10 荧光定量 PCR 检测骨髓 MSCs 的 HBVDNA
        3.2.11 统计学分析
    3.3 结果
        3.3.1 肝硬化患者骨髓 MSCs 增殖受损
        3.3.2 骨髓 MSCs 的表型特征
        3.3.3 骨髓 MSCs 体外诱导分化为脂肪细胞
        3.3.4 骨髓 MSCs 体外诱导分化为成骨细胞
        3.3.5 骨髓 MSCs 体外诱导分化为神经元样细胞
        3.3.6 骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 染色和 HBVDNA 检测
    3.4 讨论
第4章 乙型肝炎肝硬化患者骨髓MSCs分化为肝细胞样细胞的实验研究
    4.1 材料和方法
        4.1.1 主要仪器
        4.1.2 主要试剂
    4.2 方法
        4.2.1 肝硬化患者骨髓 MSCs 的体外分离培养
        4.2.2 肝细胞诱导培养基诱导肝硬化患者骨髓 MSCs
        4.2.3 肝硬化患者自体血清诱导骨髓 MSCs
        4.2.4 免疫组化法检测骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 表达
        4.2.5 荧光定量 PCR 检测骨髓 MSCs 的 HBVDNA
        4.2.6 RT-PCR 检测骨髓 MSCs ALB mRNA 的表达
        4.2.7 统计学分析
    4.3 结果
        4.3.1 肝细胞诱导培养基诱导肝硬化患者骨髓 MSCs 分化为肝细胞样细胞
        4.3.2 骨髓 MSCs 具有糖原合成功能
        4.3.3 骨髓 MSCs 表达 ALB mRNA
    4.4 肝硬化患者自体血清诱导骨髓 MSCs 分化为肝细胞样细胞
        4.4.1 肝硬化患者血清 HBVDNA 和生化检测结果
        4.4.2 骨髓 MSCs 形态变化
        4.4.3 骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 染色和 HBVDNA 检测结果
        4.4.4 骨髓 MSCs 表达 ALB, CK-18 和 AFP
        4.4.5 骨髓 MSCs 的糖原合成功能
        4.4.6 骨髓 MSCs 表达 ALB mRNA
    4.5 讨论
第5章 结论
参考文献
创新点
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[3]体外定向诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞[J]. 孙伟,胡亮,赵兴,李官成,付炳方,潘颂华.  安徽农业科学. 2010(07)
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[10]体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究[J]. 鲁学恒,马力,刘沛.  中国医科大学学报. 2007(03)



本文编号：3422621