不同弹性模量基底上骨髓间充质干细胞与肝内细胞间的相互作用
发布时间：2021-10-13 04:27
为探索在肝纤维化的干细胞治疗中,基底力学微环境和细胞间相互作用对骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）分化,以及肝内细胞功能和表型的影响。本研究通过制备不同弹性模量（杨氏模量分别为:4.5±0.47 kPa、19±3.51 kPa、37±2.09 kPa）的聚乙烯醇水凝胶基底来构建不同的基底力学环境,采用非接触性细胞共培养的方法,将BMSCs-肝细胞、BMSCs-肝星状细胞（Hepatic stellate cells,HSCs）共培养于不同弹性模量的PVA水凝胶基底上。利用实时荧光定量PCR技术、流式细胞术等实验手段,研究了力学环境对BMSCs、肝细胞和HSCs的功能影响;研究了不同基底力学微环境中BMSCs对HSCs的活化和肝细胞的增殖影响;以及不同基底力学微环境中HSCs和肝细胞分别对BMSCs分化的影响。实验结果显示,BMSCs、肝细胞和HSCs在我们制备的三种弹性模量的聚乙烯醇水凝胶基底上都能够良好的生长。随着基底弹性模量的增加,单独培养的BMSCs和HSCs的α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle a...
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
自行设计的拉伸装置示意图
冷却到室温的 8%的 PVA 溶液。呈现出透明稠状。图2.2d 是按一定配比加入盐酸和戊二醛化学交联后的 PVA 水凝胶。水凝胶厚度均匀，大约 2 mm。图 2.2e 是经过 Sulfo-SANPAH 光敏交联后的 PVA 水凝胶。水凝胶本身是无色的，经过 Sulfo-SANPAH 光敏交联后，呈现出淡淡的红色。
图 2.3 聚乙烯醇弹性模量测定值[60]（a）软、中等和硬的 PVA 水凝胶 SEM 图；（b）不同浓度交联剂的 PVA 水凝胶的弹性模量；（c）通过 SEM 图像统计的软、中等和硬的水凝胶的孔径大小；（d）水凝胶的形态。Figure 2.3 Determination of elastic modulus of polyvinyl alcohol(a) SEM images of soft, moderate and stiff PVA hydrogels. (b) Elastic modulus of PVA hydrogelscontain different concentration of crosslinkers. (c) Pore size of dried soft, moderate and stiffhydroges substrates statisticed by SEM images. (d) Morphology of hydrogels prepared.根据研究报道[76,77]，通过瞬时弹性成像评估肝脏的硬度显示：正常肝脏的硬度，纤维化肝脏的早期和晚期，分别为 1.5-4.5 kPa，4.1-12.9 kPa 和 16.3-48 kPa，也有研究表明[74]，人体正常的肝弹性模量值在 2.5-7 kPa 之间，细胞较适宜的生存环境为 2.5-5 kPa，所以我们把正常肝的弹性模量设定为 4.5 kPa，选取 19 kPa 为纤维化形成后的弹性模量，选取 37 kPa 为纤维化后期或肝硬化的弹性模量。选定的三种弹性模量水凝胶的制作配比如表 2.1 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝纤维化发生机制的研究新进展[J]. 黄芹,朱晓宁,汪静. 西南军医. 2016(03)
[2]聚乙烯醇水凝胶功能化改性研究进展[J]. 张毅,叶林. 材料导报. 2016(09)
[3]用于细胞培养的聚乙烯醇水凝胶力学性能模拟及定量控制[J]. 邹小兵,刘美霞,于光磊,王红兵,杨力,张持,许蓉. 世界科技研究与发展. 2013(06)
[4]骨髓间充质干细胞在大鼠肝纤维化模型中的作用[J]. 邰沁文,张金辉,赵晋明,温浩. 中华实验外科杂志. 2012 (10)
[5]骨髓间质干细胞培养上清液调控肝细胞的体外研究[J]. 谭雷,胡昆鹏,徐丽南,姚志成,徐见亮,林楠,卢逸,许瑞云. 器官移植. 2012(04)
[6]大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定[J]. 李晓峰,赵劲民,苏伟,崔向荣,罗世兴,马爱国. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(10)
[7]镶嵌纳米级再生丝素蛋白聚乙烯醇膜的制备与促细胞生长性能[J]. 陈忠敏,郝雪菲,范开. 生物医学工程学杂志. 2010(06)
[8]骨髓间充质干细胞调控肝星状细胞RhoA、P27的表达[J]. 苏思标,姜海行,王东旭,覃山羽,梁梓宇. 世界华人消化杂志. 2009(32)
[9]人骨髓间质干细胞对肝星状细胞的体外调控[J]. 胡昆鹏,林楠,林继宗,邓美海,汤照峰,项鹏,许瑞云. 中国组织工程研究与临床康复. 2009(27)
[10]骨髓单个核细胞移植对不同Child-Pugh分级肝硬化血清胆碱酯酶的影响[J]. 王帅,姚鹏,龚丽娟,闻炜,李树玲,胡学玲,胡大荣. 肝脏. 2009(03)
博士论文
[1]活化肝星状细胞促进干细胞定向分化和肝损伤修复[D]. 邓星.第二军医大学 2008
硕士论文
[1]用于细胞培养的聚乙烯醇/海藻酸钙水凝胶力学性能的模拟及定量控制[D]. 郑丹.重庆大学 2014
[2]罗格列酮对非酒精性脂肪性肝纤维化肝星状细胞活化及PPARγ、TGFβ1表达的影响[D]. 付娜.河北医科大学 2008
本文编号：3433946
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
自行设计的拉伸装置示意图
冷却到室温的 8%的 PVA 溶液。呈现出透明稠状。图2.2d 是按一定配比加入盐酸和戊二醛化学交联后的 PVA 水凝胶。水凝胶厚度均匀，大约 2 mm。图 2.2e 是经过 Sulfo-SANPAH 光敏交联后的 PVA 水凝胶。水凝胶本身是无色的，经过 Sulfo-SANPAH 光敏交联后，呈现出淡淡的红色。
图 2.3 聚乙烯醇弹性模量测定值[60]（a）软、中等和硬的 PVA 水凝胶 SEM 图；（b）不同浓度交联剂的 PVA 水凝胶的弹性模量；（c）通过 SEM 图像统计的软、中等和硬的水凝胶的孔径大小；（d）水凝胶的形态。Figure 2.3 Determination of elastic modulus of polyvinyl alcohol(a) SEM images of soft, moderate and stiff PVA hydrogels. (b) Elastic modulus of PVA hydrogelscontain different concentration of crosslinkers. (c) Pore size of dried soft, moderate and stiffhydroges substrates statisticed by SEM images. (d) Morphology of hydrogels prepared.根据研究报道[76,77]，通过瞬时弹性成像评估肝脏的硬度显示：正常肝脏的硬度，纤维化肝脏的早期和晚期，分别为 1.5-4.5 kPa，4.1-12.9 kPa 和 16.3-48 kPa，也有研究表明[74]，人体正常的肝弹性模量值在 2.5-7 kPa 之间，细胞较适宜的生存环境为 2.5-5 kPa，所以我们把正常肝的弹性模量设定为 4.5 kPa，选取 19 kPa 为纤维化形成后的弹性模量，选取 37 kPa 为纤维化后期或肝硬化的弹性模量。选定的三种弹性模量水凝胶的制作配比如表 2.1 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝纤维化发生机制的研究新进展[J]. 黄芹,朱晓宁,汪静. 西南军医. 2016(03)
[2]聚乙烯醇水凝胶功能化改性研究进展[J]. 张毅,叶林. 材料导报. 2016(09)
[3]用于细胞培养的聚乙烯醇水凝胶力学性能模拟及定量控制[J]. 邹小兵,刘美霞,于光磊,王红兵,杨力,张持,许蓉. 世界科技研究与发展. 2013(06)
[4]骨髓间充质干细胞在大鼠肝纤维化模型中的作用[J]. 邰沁文,张金辉,赵晋明,温浩. 中华实验外科杂志. 2012 (10)
[5]骨髓间质干细胞培养上清液调控肝细胞的体外研究[J]. 谭雷,胡昆鹏,徐丽南,姚志成,徐见亮,林楠,卢逸,许瑞云. 器官移植. 2012(04)
[6]大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定[J]. 李晓峰,赵劲民,苏伟,崔向荣,罗世兴,马爱国. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(10)
[7]镶嵌纳米级再生丝素蛋白聚乙烯醇膜的制备与促细胞生长性能[J]. 陈忠敏,郝雪菲,范开. 生物医学工程学杂志. 2010(06)
[8]骨髓间充质干细胞调控肝星状细胞RhoA、P27的表达[J]. 苏思标,姜海行,王东旭,覃山羽,梁梓宇. 世界华人消化杂志. 2009(32)
[9]人骨髓间质干细胞对肝星状细胞的体外调控[J]. 胡昆鹏,林楠,林继宗,邓美海,汤照峰,项鹏,许瑞云. 中国组织工程研究与临床康复. 2009(27)
[10]骨髓单个核细胞移植对不同Child-Pugh分级肝硬化血清胆碱酯酶的影响[J]. 王帅,姚鹏,龚丽娟,闻炜,李树玲,胡学玲,胡大荣. 肝脏. 2009(03)
博士论文
[1]活化肝星状细胞促进干细胞定向分化和肝损伤修复[D]. 邓星.第二军医大学 2008
硕士论文
[1]用于细胞培养的聚乙烯醇/海藻酸钙水凝胶力学性能的模拟及定量控制[D]. 郑丹.重庆大学 2014
[2]罗格列酮对非酒精性脂肪性肝纤维化肝星状细胞活化及PPARγ、TGFβ1表达的影响[D]. 付娜.河北医科大学 2008
本文编号：3433946
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