丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6（HCBP6）基因转录调节机制初步研究

发布时间：2021-10-13 07:27

　　丙型肝炎病毒是引起慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原之一,每年约有250,000-350,000人死于HCV相关终末期肝病、肝硬化及肝癌。HCV感染对患者的健康和生命危害极大,已成为严重的社会和公共卫生问题,但针对HCV感染的治疗手段有限,目前唯一的治疗手段是干扰素加利巴韦林,而且不能用于失代偿期的患者。迄今为止,还没有可预防HCV感染的疫苗。不能更深入的揭示HCV的发病机制是造成预防与治疗的相对滞后的主要原因之一,因此,进一步探寻HCV致病的分子生物学机制是目前研究的热点问题。丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6（HCBP6）是本实验室前期应用酵母双杂交技术从肝细胞cDNA文库中筛选得到的一种与HCV核心蛋白结合的蛋白。且本实验室前期发现, HCBP6蛋白能够上调和下调一系列不同基因的表达水平,这些差异表达的基因与细胞信号转导、增生、分化及生长调节密切相关。因此有必要对HCBP6进一步深入研究。真核生物的基因表达及调节作用是多水平的调节,其中主要是以转录水平的调节研究较为清楚。转录调控的本质就是蛋白质与DNA或者蛋白质与蛋白质之间的相互作用。丙型肝炎病毒属于RNA病毒,HCV生活周期中并不存... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【图文】：

图1一7

在相关生物网站预测可知，在启动子HCBP6一1及HCBP6一2序列之间的差异序列上存在转录因子SPI的结合位点，其序列为GGGcGG，在本部分实验中经EMsA实验验证可与核蛋白特异性结合，证明该位点确实为转录因子sPI的结合位点。(见图2一2)附图Unabled一 EBNADNA 2pl EBNAExtractl拌 1lplBiotin一 EBNAControlDNA 2p12p12协l图2一1试剂盒阳性对照的EMSA分析在非变性凝胶中，探针的泳动速度比蛋白快，所以探针与蛋白可通过电泳分开，探针在胶的卜方而蛋自在上方。第一泳道，只加有生物素标记的探针，所以只有探针带。第二泳道，同时加有核蛋自与标记探针，可同时看到探针带和蛋自带，说明部分探针与核蛋自结合。第三泳道，同时加野生探针，100倍浓度未标记的冷探针，及核蛋自，结果蛋自条带消失，说明大剂量未标记的冷探针可将野生探针从核蛋白上竞争一卜来。

里子生探针++十++一抗SPI抗体图2一 2SPI转录因子结合位点的EMSA分析在电泳过程中，探针移动速率快在下方，蛋白移动较慢在上方。在第1泳道，只有野生探针。第二泳道，加入核蛋自与突变的探针，只有微弱的蛋自条带显示。第二泳道，探针与核蛋白均可显现，说明野生探针可与核蛋白结合，从而使蛋自显像，而未结合的游离探针出现在探针的位置。第四泳道，同时加入核蛋白，野生探针及100倍浓度的冷探针，只有微弱的蛋白条带显示，说明大剂量的冷探针可将野生探针从核蛋白上竞争卜来。第五泳道，同时加入野生探针，核蛋白，以及高浓度的突变探针

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3434217