羟氯喹减轻氟尿嘧啶诱导的小鼠肠炎及机制

发布时间：2021-10-20 04:41

　　目的探讨羟氯喹（HCQ）在化疗药物诱导的肠炎中的治疗作用及其可能的分子机制。方法 30只C57B6/J小鼠随机分为0、 1、 3、 5、 7 d组,第1～3天腹腔注射氟尿嘧啶（5-FU）200μL/d（50 mg/kg）,分别于第0、 1、 3、 5、 7天处死,双链DNA（dsDNA）定量试剂盒检测血清及小肠液dsDNA水平,腹泻评分评估小鼠肠炎病情。体外培养HCT-116细胞,分别以（0、 0.01、 0.1、 0.5、 1、 10）μmol/L 5-FU处理72 h或1μmol/L 5-FU处理24、 48、 72 h,dsDNA定量试剂盒检测各组细胞培养上清dsDNA水平。24只C57B6/J小鼠随机分为:对照组（腹腔注射并灌胃生理盐水200μL/d）、模型组（腹腔注射50 mg/kg 5-FU 200μL/d、灌胃生理盐水200μL/d）、 HCQ治疗组（腹腔注射50 mg/kg 5-FU 200μL/d前一天起灌胃60 mg/kg HCQ溶液200μL/d）、 HCQ单药组（灌胃60 mg/kg HCQ溶液200μL/d）,处理6 d处死小鼠。HE染色观察小肠病变,原位末端... 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2020,36(01)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

HCQ通过抑制TLR9-NF-κB通路减少炎症因子产生

本实验首先成功建立了5-FU诱导的肠炎模型: HE染色显示: 与对照组相比, 模型组小鼠小肠绒毛出现了严重的损失和破坏, 绒毛缩短, 隐窝变浅(图1A)。TUNEL染色同样显示5-FU导致小鼠小肠上皮细胞的大量凋亡(图1B)。5-FU作为一种细胞毒药物, 主要通过干扰DNA 的合成发挥药理作用。5-FU诱导细胞凋亡后会释放大量dsDNA, 因此我们推测dsDNA可能与5-FU导致的肠炎有关。结果显示: 在给药实验中, 小鼠血清及腹腔中dsDNA随5-FU给药呈同步动态变化趋势(图1C), 与小鼠腹泻评分动态变化趋势一致(图1D), 证实5-FU导致的肠炎与dsDNA 存在相关性。在体外实验中, 我们选取HCT-116细胞系模拟小鼠肠上皮细胞, 在不同浓度及不同时间的5-FU干预下检测dsDNA 的浓度。结果显示dsDNA水平随5-FU给药浓度与给药时间的变化而变化(图1E、 F)。因此, 上述结果初步说明dsDNA与5-FU诱导的肠炎可能具有相关性, 我们推测dsDNA作为一种DAMP介导5-FU诱导的肠炎。2.2 HCQ通过抑制TLR9-NF-κB通路减少炎症因子的产生

上述实验从体外实验证明HCQ通过抑制TLR9-NF-κB通路减少炎症。接下来, 我们从体内实验分析了HCQ对小鼠肠炎及其TLR9-NF-κB通路的影响。HE染色显示, HCQ明显减轻5-FU导致的小鼠小肠上皮的破坏(图3A)。免疫荧光染色显示, HCQ同样降低小鼠小肠中TLR9、 NF-κB的水平(图3B、 C); ELISA结果显示HCQ明显降低小鼠血清内炎症因子IL-1β水平(图3D)。上述结果在体内证明了HCQ通过抑制TLR9-NF-κB通路减少5-FU诱导的肠炎。3 讨论


本文编号：3446263