瘦素对脂变人肝细胞TG的含量及PPARα、CPT-Ⅰ、LPL表达的影响

发布时间：2021-10-28 20:49

　　目的:观察瘦素对脂变肝细胞甘油三酯含量、脂滴形成和PPARα及其目标基因CPT-I、LPL mRNA表达的影响,初步探讨瘦素对肝细胞脂质变性的作用及其机制,为早期临床防治NAFL提供理论基础。方法:以离体人肝L-02细胞株为研究对象。用含10%医用脂肪乳注射液和10%胎牛血清的RPMI-1640的完全培养基孵育人肝L-02细胞24小时,制备肝细胞脂肪变性模型。实验分为正常肝细胞组、模型组,即脂变肝细胞组、不同浓度瘦素组（使瘦素终浓度分别为10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L）、阳性对照组（即脂变肝细胞加入吉非罗齐,使其终浓度为100mg/L）;孵育24小时后,油红O染色观察细胞形态和细胞内脂滴的形成情况,高效液相色谱法检测细胞内甘油三酯的含量,半定量RT-PCR法检测PPARα及其目标基因CPT-I、LPL mRNA水平的表达。根据瘦素改善细胞内甘油三酯的含量情况,作出量效关系,然后以瘦素10-7mol/L浓度分别孵育模型组细胞12h,24h,48h,使用上述观察方法,作出时效关系。实验数据以x±s表示,用SPSS13.0统计软件对数据进行分析,以P<0.0... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

正常组(油红O×400)

实 验 结 果1 肝细胞脂肪变性模型的建立：正常组肝细胞油红 O 染色后，光镜下观察：肝细胞形态正常，为多边胞核蓝染，胞膜界限清楚，胞浆内未见脂滴。模型组肝细胞系用含体积分数医用脂肪乳注射液和 10%胎牛血清的 RPMI-1640 完全培养基孵育人肝 L胞 24 小时，油红 O 染色显示胞浆内见大量红色的小泡性脂滴，肝细胞肿细胞核位于细胞中央，符合肝细胞小泡性脂肪变性特征(见图 1，2)。高效测定细胞内甘油三酯含量，模型组与正常组细胞内甘油三酯含量分1.612±0.104mmol/g 蛋白， 0.417±0.045mmol/g 蛋白，差别有统计学(p<0.01)(见图 3)。

2 不同浓度和不同时间瘦素处理后脂滴形态数量的变化按表 1 方案处理细胞后，油红 O 染色结果发现：正常组细胞形态正常，胞膜界限清楚，无明显脂滴形成；模型组肝细胞肿胀，细胞浆内可见大量红色的小泡性脂滴，瘦素(10-8mol/ L，10-7mol/ L，10-6mol/L)处理组及阳性对照组细胞浆内仅少量红色的小泡性脂滴(见图 1，2，4~7)，随着瘦素浓度的递增，细胞内脂滴数量逐渐减少。

【参考文献】：
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本文编号：3463331