慢病毒介导ToxoROP16 Ⅰ/Ⅲ 通过抑制M1型细胞保护Caco-2细胞的实验性研究
发布时间：2021-10-30 10:14
背景:炎症性肠病（Inflammatory bowel disease,IBD）是一类肠道慢性炎症性疾病,其病因和发病机制尚不明确,主要包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）和克罗恩病（Crohn’s disease,CD）。在炎症性肠病的患者中,CD中主要是以Th1型免疫反应为主,而在UC中则主要是以Th2型免疫反应为主。在IBD的治疗上,传统治疗药物由于长期使用造成患者不良反应较多、复发率较高,同时对重度患者疗效不佳。本课题组前期通过TNBS诱导的Th1型反应为主的小鼠实验性结肠炎,在通过日本血吸虫虫卵可溶性抗原,诱导产生Th2型为主的免疫应答,下调Th1型炎症反应,抑制小鼠结肠炎症,达到一定的保护作用。本实验主要在课题组前期的研究基础上,通过研究弓形虫（Toxoplasma gondii,Tg）相关毒力效应分子ROP16Ⅰ/Ⅲ(ToxoROP16Ⅰ/Ⅲ)通过激活旁路激活途径的巨噬细胞向M2（alternatively activated macrophages）型细胞极化,通过LPS（脂多糖）激活经典途径的巨噬细...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS诱导RAW264.7细胞时间点的选择
图 2 LPS 诱导 RAW264.7 细胞时间点的选择Fig 2. Selection of optimal time points for LPS stimulation of macrophagesTo explore the best time point for 1μg/ml of LPS stimulated of Mφ cells. Seeded in 6-well platewith 2×106cells per well to detected of iNOS expression within 24 hours, then we selected gradient of time. In order to select the best time point for cells and supernatant collection anddetection. After stimulated 6 hours iNOS start expression.3.3 LPS 诱导 RAW264.7 向 M1 炎性细胞极化的结果3.3.1 qRT-PCR 法定量 RAW264.7 细胞向 M1 型炎性细胞极化的结果用荧光定量 PCR 法（qRT-PCR 法）定量经过经典激活途径表达具有 M1 型的炎性巨噬细胞产生的促炎因子如 IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS，在 M1 型炎症组中IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS 表达明显上调，差异具有显著的统计学意义,且 p<0.001。见图 3。
Fig 3. The expression mRNA of IL-6, IL-1 β, TNF-α and iNOS in M1 inflammatory cells byLPS induced RAW264.7.a: mRAN expression of IL-6 in each group; b: mRAN expression of IL-1 β in each group; c: mRANexpression of TNF- α in each group; d: mRAN expression of iNOS in each group; comparison withnormal group: *** p < 0.001.3.3.2 ELISA 法检测 LPS 诱导 RAW264.7 细胞向 M1 型炎性细胞极化的结果用 ELISA 法检测细胞上清液中 M1 型炎性细胞极化过程中分泌的 IL-6、IL-1β和 TNF-α的情况。上清液同前被分成五组组进行比较，经典途径极化的 M1 型细胞的上清中较正常 RAW264.7 细胞组，分泌 IL-6 (p<0.001)、IL-1β (p<0.001)和 TNF-α(p<0.001)明显增高，差异有统计学意义。其结果与在 mRAN 的表达的水平上是相互一致的。在正常组和空载慢病毒组，以及慢病毒组未见明显升高。见图 4。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Immunopathology of inflammatory bowel disease[J]. Kori L Wallace,Li-Bo Zheng,Yoshitake Kanazawa,David Q Shih. World Journal of Gastroenterology. 2014(01)
[2]Innate and adaptive immunity in inflammatory bowel disease[J]. Britta Siegmund,Martin Zeitz. World Journal of Gastroenterology. 2011(27)
本文编号：3466549
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS诱导RAW264.7细胞时间点的选择
图 2 LPS 诱导 RAW264.7 细胞时间点的选择Fig 2. Selection of optimal time points for LPS stimulation of macrophagesTo explore the best time point for 1μg/ml of LPS stimulated of Mφ cells. Seeded in 6-well platewith 2×106cells per well to detected of iNOS expression within 24 hours, then we selected gradient of time. In order to select the best time point for cells and supernatant collection anddetection. After stimulated 6 hours iNOS start expression.3.3 LPS 诱导 RAW264.7 向 M1 炎性细胞极化的结果3.3.1 qRT-PCR 法定量 RAW264.7 细胞向 M1 型炎性细胞极化的结果用荧光定量 PCR 法（qRT-PCR 法）定量经过经典激活途径表达具有 M1 型的炎性巨噬细胞产生的促炎因子如 IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS，在 M1 型炎症组中IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS 表达明显上调，差异具有显著的统计学意义,且 p<0.001。见图 3。
Fig 3. The expression mRNA of IL-6, IL-1 β, TNF-α and iNOS in M1 inflammatory cells byLPS induced RAW264.7.a: mRAN expression of IL-6 in each group; b: mRAN expression of IL-1 β in each group; c: mRANexpression of TNF- α in each group; d: mRAN expression of iNOS in each group; comparison withnormal group: *** p < 0.001.3.3.2 ELISA 法检测 LPS 诱导 RAW264.7 细胞向 M1 型炎性细胞极化的结果用 ELISA 法检测细胞上清液中 M1 型炎性细胞极化过程中分泌的 IL-6、IL-1β和 TNF-α的情况。上清液同前被分成五组组进行比较，经典途径极化的 M1 型细胞的上清中较正常 RAW264.7 细胞组，分泌 IL-6 (p<0.001)、IL-1β (p<0.001)和 TNF-α(p<0.001)明显增高，差异有统计学意义。其结果与在 mRAN 的表达的水平上是相互一致的。在正常组和空载慢病毒组，以及慢病毒组未见明显升高。见图 4。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Immunopathology of inflammatory bowel disease[J]. Kori L Wallace,Li-Bo Zheng,Yoshitake Kanazawa,David Q Shih. World Journal of Gastroenterology. 2014(01)
[2]Innate and adaptive immunity in inflammatory bowel disease[J]. Britta Siegmund,Martin Zeitz. World Journal of Gastroenterology. 2011(27)
本文编号：3466549
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