HBV-Alu-PCR对乙肝相关性肝癌中HBV整合位点的研究

发布时间：2021-11-12 22:35

　　目的了解乙型肝炎病毒（HBV）感染与肝细胞癌（HCC）的关系,探讨乙型肝炎病毒（HBV）在肝细胞染色体上的整合规律及其在肝癌形成中的作用,了解肝细胞癌的发生机制。应用HBV-Alu-PCR方法检测肝细胞癌（HCC）中HBVDNA整合。方法提取乙肝相关性肝癌组织标本中的DNA为模板,设计HBV的亚基因片段X、C、S的引物以检测其中的HBVDNA,这个产物包括游离形式的和整合形式的HBVDNA;然后再设计HBV的上游序列和人类基因组Alu重复序列为引物,设计的引物中引入U碱基,应用巢式PCR的原理,利用降落PCR技术,使用高度敏感的HBV-Alu-PCR方法扩增出整合形式的HBV基因片段及其侧翼的人基因组DNA片段,建立克隆整合的HBVDNA及其相邻的细胞基因序列的PCR技术。PCR产物送生物公司测序,所获结果经美国国家生物技术信息中心（national center forbiotechnology information NCBI）BLAST及MapViewer检索确定HBV整合在染色体上的精确位置。结果24份例HBsAg阳性的肝癌组织中,通过HBV-PCR方法几乎均能检测到HBV的X... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

聚合酶链反应原理及过程

(l)原理利用巢式PCR的原理，以Alu一PCR为基础，应用人类Alu序列和HBV序列的特殊引物来扩增病毒和宿主的结合位点【’9]。扩增策略采用改良的套式PcR技术，见图3，是在套式PCR的基础上加以改进，先设定一个HBV序列的引物 HBVI和另一个细胞Alu序列的引物作为外侧引物，同时又设计一个HBV:引物和Tag引物作为内侧引物，在此内侧引物的内侧还设计一个内内侧引物HBv3和Tag作为第3对引物，进行半套式扩增。为了避免扩增Ahi重复序列之间的DNA片段，引物中引入dUTPS。引物如表2。

HBv一lu-PcR产物测序序列HRs2743在人类染色体上的定位(Pubmed)

【参考文献】：
期刊论文
[1]肝癌中乙型肝炎病毒整合位点的研究[J]. 屠红,高海峰,马国豪,刘毅.  中华医学杂志. 2006(18)
[2]中国3岁以上人群乙型肝炎血清流行病学研究[J]. 梁晓峰,陈园生,王晓军,贺雄,陈丽娟,王骏,林长缨,白呼群,严俊,崔钢,于竞进.  中华流行病学杂志. 2005(09)
[3]肝癌中乙型肝炎病毒整合位点的分离鉴定[J]. 高海峰,屠红.  中华肝脏病杂志. 2004(09)
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本文编号：3491762