NADPH氧化酶对大麻素受体1（CB1）的调节机制及CB1在血吸虫性肝纤维化形成中的作用研究
发布时间：2021-11-14 11:09
目的：观察血吸虫感染对原代肝星状细胞（HSC）向纤维化表型转化的影响。方法：1)建立血吸虫肝纤维化模型,利用腹部尾蚴敷贴法建立血吸虫肝纤维化模型,应用HE染色和Masson染色方法观察和鉴定血吸虫肝纤维化的形成。2)提取原代肝星状细胞,应用两步酶消化联合非连续梯度密度离心法分离提取原代HSC3)应用免疫荧光方法标记α-SMA对提取的原代HSC进行鉴定,并比较正常组与模型组提取的HSC内α-SMA表达量的差别。4)应用RT-Real-time PCR技术检测原代肝星状细胞内α-SMA和desmin基因转录水平,并且比较正常组提取的原代肝星状细胞与肝纤维化模型组提取的原代肝星状细胞之间的差异。5)应用免疫印迹（Western blot）方法检测原代肝星状细胞内α-SMA和desmin蛋白表达水平,并且比较正常组提取的原代肝星状细胞与肝纤维化模型组提取的原代肝星状细胞之间的差异。同时利用免疫印迹法比较正常组原代HSC与模型组HSC内各种肝纤维化指标的变化,以及血吸虫虫卵抗原刺激前后HSC内各种肝纤维化指标的变化。结果：1)血吸虫感染小鼠六周后,取小鼠肝脏组织做病理检测,由HE染色显示,在感染...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
正常组与血吸虫肝损伤模型小鼠肝脏组织的HE染色图（X200)
3. 1. 3Masson 染色Masson染色后，胶原纤维被染成蓝色，细胞奖将会被染成红色。由图2A我们可以看到正常组小鼠的肝脏组织内蓝色的胶原纤维少量的围绕在中央静脉，动脉以及小叶间静动脉周围，而在肝小叶内及肝小叶间未发现蓝色胶原纤维的沉积。由图2B我们可以看到在血吸虫性肝纤维化小鼠的肝脏组织内我们可发现围绕血吸虫虫卵结节周围有大量胶原纤维形成，并且在肝小叶之间也出现大量胶原沉积，同时肝小叶结构也遭到破坏。见图2_圓A为正常组小鼠肝脏组织切片 B为血吸虫性肝纤维化小鼠肝脏组织切片图2正常组与血吸虫肝损伤模型小鼠肝脏组织的Masson染色图（x200)32
光方法进行a -SMA的突光染色，众所周知a -SMA为肝星状细胞的标记蛋白，通常将其作为鉴定原代肝星状细胞的指标，由图3A我们可以看出两组肝星状细胞均表达a-SMA，但是模型组的HSC的突光表达强度明显高于正常对照组的HSC,说明肝星状细胞在血吸虫感染小鼠体内就已经被激活并且表达更多的a-SMA。为了更进一步证明所提取的原代细胞为肝星状细胞，我们同时以肾脏足突状细胞(Podocyte)和冠状动脉内平滑肌细胞(SMC)作为确切表达a -SMA和desmin的阳性对照细胞，利用Westrn bolt方法鉴定提取的原代细胞是否同时表达a-SMA和desmin进一步证实其为肝星状细胞，由图3B可以看出提取的原代细胞与足突状细胞和平滑肌细胞均表达a-SMA和desmin,因此由图3可鉴定提取的原代细胞为肝星状细胞。Aa-SMAurnCtrl InKctcdBKDaO-SMA- 42Desmirv rZI ^ 1「八P-actin-Podo SMC HSC图3不同方法对原代肝星状细胞的鉴定33
【参考文献】：
期刊论文
[1]Dynamic changes in the expression of matrix metalloproteinases and their inhibitors,TIMPs,during hepatic fibrosis induced by alcohol in rats[J]. Guang-Fu Xu Department of infectious Diseases,1~(st) Affiliated Dongzhimen Hospital,Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100700,China Xin-Yue Wang De-Lu Tian Liang-Duo Jiang Jin-Xiang Yang Department of Digestive Diseases,1~(st) Aff’diated Dongzhimen Hospital,Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100700,China Peng-Tao Li Xu Jia Basic Medicine College of Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100029,China. World Journal of Gastroenterology. 2004(24)
[2]苦参碱抑制小鼠腹膜巨噬细胞纤维化细胞因子的产生和作用(英文)[J]. 张俊平,张珉,金城,周斌,谢渭芬,郭澄,张纯,钱定华. Acta Pharmacologica Sinica. 2001(08)
[3]Dynamic changes of type Ⅰ,Ⅲ and N collagen synthesis and distribution of collagen-producing cells in carbon tetrachloride-induced rat liver fibrosis[J]. DU Wei-Dong; ZHANG Yue-E; ZHAl Wei-Rong and ZHOU Xiao-Mei(Department of Pathology, Shanghai Medical University, Shanghai200032, China)(National Laboratory for Oncogenes and Related Genes, ShanghaiCencer Institute)See invited commentary on page 388. World Journal of Gastroenterology. 1999(05)
本文编号：3494530
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
正常组与血吸虫肝损伤模型小鼠肝脏组织的HE染色图（X200)
3. 1. 3Masson 染色Masson染色后，胶原纤维被染成蓝色，细胞奖将会被染成红色。由图2A我们可以看到正常组小鼠的肝脏组织内蓝色的胶原纤维少量的围绕在中央静脉，动脉以及小叶间静动脉周围，而在肝小叶内及肝小叶间未发现蓝色胶原纤维的沉积。由图2B我们可以看到在血吸虫性肝纤维化小鼠的肝脏组织内我们可发现围绕血吸虫虫卵结节周围有大量胶原纤维形成，并且在肝小叶之间也出现大量胶原沉积，同时肝小叶结构也遭到破坏。见图2_圓A为正常组小鼠肝脏组织切片 B为血吸虫性肝纤维化小鼠肝脏组织切片图2正常组与血吸虫肝损伤模型小鼠肝脏组织的Masson染色图（x200)32
光方法进行a -SMA的突光染色，众所周知a -SMA为肝星状细胞的标记蛋白，通常将其作为鉴定原代肝星状细胞的指标，由图3A我们可以看出两组肝星状细胞均表达a-SMA，但是模型组的HSC的突光表达强度明显高于正常对照组的HSC,说明肝星状细胞在血吸虫感染小鼠体内就已经被激活并且表达更多的a-SMA。为了更进一步证明所提取的原代细胞为肝星状细胞，我们同时以肾脏足突状细胞(Podocyte)和冠状动脉内平滑肌细胞(SMC)作为确切表达a -SMA和desmin的阳性对照细胞，利用Westrn bolt方法鉴定提取的原代细胞是否同时表达a-SMA和desmin进一步证实其为肝星状细胞，由图3B可以看出提取的原代细胞与足突状细胞和平滑肌细胞均表达a-SMA和desmin,因此由图3可鉴定提取的原代细胞为肝星状细胞。Aa-SMAurnCtrl InKctcdBKDaO-SMA- 42Desmirv rZI ^ 1「八P-actin-Podo SMC HSC图3不同方法对原代肝星状细胞的鉴定33
【参考文献】：
期刊论文
[1]Dynamic changes in the expression of matrix metalloproteinases and their inhibitors,TIMPs,during hepatic fibrosis induced by alcohol in rats[J]. Guang-Fu Xu Department of infectious Diseases,1~(st) Affiliated Dongzhimen Hospital,Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100700,China Xin-Yue Wang De-Lu Tian Liang-Duo Jiang Jin-Xiang Yang Department of Digestive Diseases,1~(st) Aff’diated Dongzhimen Hospital,Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100700,China Peng-Tao Li Xu Jia Basic Medicine College of Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100029,China. World Journal of Gastroenterology. 2004(24)
[2]苦参碱抑制小鼠腹膜巨噬细胞纤维化细胞因子的产生和作用(英文)[J]. 张俊平,张珉,金城,周斌,谢渭芬,郭澄,张纯,钱定华. Acta Pharmacologica Sinica. 2001(08)
[3]Dynamic changes of type Ⅰ,Ⅲ and N collagen synthesis and distribution of collagen-producing cells in carbon tetrachloride-induced rat liver fibrosis[J]. DU Wei-Dong; ZHANG Yue-E; ZHAl Wei-Rong and ZHOU Xiao-Mei(Department of Pathology, Shanghai Medical University, Shanghai200032, China)(National Laboratory for Oncogenes and Related Genes, ShanghaiCencer Institute)See invited commentary on page 388. World Journal of Gastroenterology. 1999(05)
本文编号：3494530
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3494530.html
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