Smurf在肝纤维化中的表达及其对TGF-β/Smad信号传导的影响
发布时间：2021-11-16 19:21
目的探讨Smurf泛素化机制对肝纤维化发生、发展的影响,为抗纤维化靶向治疗开辟一条新途径。方法将对数生长期一定密度的肝星状细胞（HSC）,按实验分组。A组:DMEM培养液+HSC细胞+转化生长因子-β（TGF-β）（浓度为0 ng/mL）;B组:DMEM培养液+HSC细胞+TGF-β（浓度为1 ng/mL）;C组:DMEM培养液+HSC细胞+TGF-β（浓度为2.5 ng/mL）;D组:DMEM培养液+HSC细胞+TGF-β（浓度为5ng/mL）;E组:DMEM培养液+HSC细胞+TGF-β（浓度为10 ng/mL）;F组:DMEM培养液+HSC细胞+TGF-β（浓度为5 ng/mL）+硼替佐米40 ng/mL。各组细胞均接种在24孔培养板,依次加入不同浓度TGF-β,并以蛋白酶体抑制剂硼替佐米作为阻断剂,探讨Smurf在肝纤维化中的作用,培养一段时间后采用免疫组化方法检测Smurf1、Smurf2、Smad7的表达及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,RT-PCR检测胶原的表达,TGF-β的浓度梯度为0、1、2.5、5、10 ng/mL。每组均设3个复孔,并至少重复2次以上。结果...
【文章来源】：广东医学. 2017,38(06)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
活化的HSC表达α－SMA(×200)
图2各组肝星状细胞Smurf1、Smurf2、Smad7的表达(×400)2．3不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达差异在肝组织中Smurf2的表达随着肝纤维化的进展，表达呈下调趋势，与肝组织免疫组化的结果一致。见表4和图3。表4不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达差异样品蛋白量吸光度值稀释蛋白量(μL)原蛋白量(μL)150μg(μL)H2Oloading14．460．1112．2311．1413．472．53426．350．1433．1715．879．456．55434．400．112．2010．9913．652．35445．520．1292．7613．8010．875．13455．700．1322．8514．2510．535．47467．060．1553．5317．658．507．50475．760．1332．8814．3910．425．58483．920．1021．969．8115．290．7142．4不同浓度硼替佐米对HSC胶原生成的影响加入硼替佐米40ng/mL后，Smurf1、Smurf2的表达没有显著变化(P＞0.05)，而Smad7的低表达受到明显抑制(P＜0.05);加入蛋白酶体抑制剂后胶原的生成受到抑制。见表5。图3不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达3讨论肝纤维化是由各种致病因子作用所致肝内胶原结缔组织异常增生，以肝内弥漫性或局灶性细胞外基质(ECM)过度沉积为病理特征，可为渐变发展的漫长过程，是肝硬化必经的病理阶段，也是肝癌常见的伴随环节［2］。现在已证实，HSC的激活以及HSC激活后异常表达ECM是肝纤维化发生、发展的两个关键环节，而TGF－β1激活HSC并促进其合成ECM则被认为是肝纤维化发病机制的核心事件。近几年研究发现，在生物进化过程中，存在复杂而精细的调节机制参与上述TGF－β/Smad信号传递过程。其中，泛素蛋白酶体通路(UPP)因发现可以影响Smads信号的表达及调控而受到关注［3－6］。表5不同浓度硼替佐米作用后胶原表达的变?
图2各组肝星状细胞Smurf1、Smurf2、Smad7的表达(×400)2．3不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达差异在肝组织中Smurf2的表达随着肝纤维化的进展，表达呈下调趋势，与肝组织免疫组化的结果一致。见表4和图3。表4不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达差异样品蛋白量吸光度值稀释蛋白量(μL)原蛋白量(μL)150μg(μL)H2Oloading14．460．1112．2311．1413．472．53426．350．1433．1715．879．456．55434．400．112．2010．9913．652．35445．520．1292．7613．8010．875．13455．700．1322．8514．2510．535．47467．060．1553．5317．658．507．50475．760．1332．8814．3910．425．58483．920．1021．969．8115．290．7142．4不同浓度硼替佐米对HSC胶原生成的影响加入硼替佐米40ng/mL后，Smurf1、Smurf2的表达没有显著变化(P＞0.05)，而Smad7的低表达受到明显抑制(P＜0.05);加入蛋白酶体抑制剂后胶原的生成受到抑制。见表5。图3不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达3讨论肝纤维化是由各种致病因子作用所致肝内胶原结缔组织异常增生，以肝内弥漫性或局灶性细胞外基质(ECM)过度沉积为病理特征，可为渐变发展的漫长过程，是肝硬化必经的病理阶段，也是肝癌常见的伴随环节［2］。现在已证实，HSC的激活以及HSC激活后异常表达ECM是肝纤维化发生、发展的两个关键环节，而TGF－β1激活HSC并促进其合成ECM则被认为是肝纤维化发病机制的核心事件。近几年研究发现，在生物进化过程中，存在复杂而精细的调节机制参与上述TGF－β/Smad信号传递过程。其中，泛素蛋白酶体通路(UPP)因发现可以影响Smads信号的表达及调控而受到关注［3－6］。表5不同浓度硼替佐米作用后胶原表达的变?
【参考文献】：
期刊论文
[1]柴胡疏肝散对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响[J]. 尚立芝,王付,王琦,苗小玲,甘陈菲,张慧娜,王帮众. 中国实验方剂学杂志. 2015(12)
[2]结缔组织生长因子在放射性肝纤维化大鼠中的动态表达及其与肝星状细胞活化的关系[J]. 王云莲,艾力江·吐尔逊,艾尼瓦尔·艾木都拉,肖蕾,张月芬,杨颖,吴戈,程纬,包永星. 中华放射医学与防护杂志. 2014 (10)
[3]用于筛选和评价抑制Ⅰ型胶原α1链基因表达的抗肝纤维化药物双报告基因系统的构建及其有效性鉴定[J]. 张伟,代晓朋,于虹,王鲁燕,孙世惠,李军锋,周育森. 中华肝脏病杂志. 2014 (10)
[4]转化生长因子-β1疫苗对大鼠肝纤维化组织中胰岛素样生长因子结合蛋白的影响[J]. 徐叶进,陈凌,陈海君,付跃娟,郭玉香,盛棋跃,陈永平. 中华传染病杂志. 2014 (07)
[5]SnoN蛋白在肝纤维化大鼠肝组织中的表达及其意义[J]. 杨壮智,阳韬,陈永平. 医学研究杂志. 2011(09)
[6]肝星状细胞中的TGFβ信号转导通路[J]. 李丽,王宝恩. 世界华人消化杂志. 2007(23)
[7]Smad通路UPP依赖性的蛋白质降解机制[J]. 李靖,张悦,韩志芬,庞慧芳,李玉梅,刘克剑. 生命的化学. 2005(05)
[8]改良法分离大鼠肝星状细胞[J]. 赵文丽,姜庆久,吴春莲,陶富山. 局解手术学杂志. 2004(04)
本文编号：3499427
【文章来源】：广东医学. 2017,38(06)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
活化的HSC表达α－SMA(×200)
图2各组肝星状细胞Smurf1、Smurf2、Smad7的表达(×400)2．3不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达差异在肝组织中Smurf2的表达随着肝纤维化的进展，表达呈下调趋势，与肝组织免疫组化的结果一致。见表4和图3。表4不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达差异样品蛋白量吸光度值稀释蛋白量(μL)原蛋白量(μL)150μg(μL)H2Oloading14．460．1112．2311．1413．472．53426．350．1433．1715．879．456．55434．400．112．2010．9913．652．35445．520．1292．7613．8010．875．13455．700．1322．8514．2510．535．47467．060．1553．5317．658．507．50475．760．1332．8814．3910．425．58483．920．1021．969．8115．290．7142．4不同浓度硼替佐米对HSC胶原生成的影响加入硼替佐米40ng/mL后，Smurf1、Smurf2的表达没有显著变化(P＞0.05)，而Smad7的低表达受到明显抑制(P＜0.05);加入蛋白酶体抑制剂后胶原的生成受到抑制。见表5。图3不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达3讨论肝纤维化是由各种致病因子作用所致肝内胶原结缔组织异常增生，以肝内弥漫性或局灶性细胞外基质(ECM)过度沉积为病理特征，可为渐变发展的漫长过程，是肝硬化必经的病理阶段，也是肝癌常见的伴随环节［2］。现在已证实，HSC的激活以及HSC激活后异常表达ECM是肝纤维化发生、发展的两个关键环节，而TGF－β1激活HSC并促进其合成ECM则被认为是肝纤维化发病机制的核心事件。近几年研究发现，在生物进化过程中，存在复杂而精细的调节机制参与上述TGF－β/Smad信号传递过程。其中，泛素蛋白酶体通路(UPP)因发现可以影响Smads信号的表达及调控而受到关注［3－6］。表5不同浓度硼替佐米作用后胶原表达的变?
图2各组肝星状细胞Smurf1、Smurf2、Smad7的表达(×400)2．3不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达差异在肝组织中Smurf2的表达随着肝纤维化的进展，表达呈下调趋势，与肝组织免疫组化的结果一致。见表4和图3。表4不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达差异样品蛋白量吸光度值稀释蛋白量(μL)原蛋白量(μL)150μg(μL)H2Oloading14．460．1112．2311．1413．472．53426．350．1433．1715．879．456．55434．400．112．2010．9913．652．35445．520．1292．7613．8010．875．13455．700．1322．8514．2510．535．47467．060．1553．5317．658．507．50475．760．1332．8814．3910．425．58483．920．1021．969．8115．290．7142．4不同浓度硼替佐米对HSC胶原生成的影响加入硼替佐米40ng/mL后，Smurf1、Smurf2的表达没有显著变化(P＞0.05)，而Smad7的低表达受到明显抑制(P＜0.05);加入蛋白酶体抑制剂后胶原的生成受到抑制。见表5。图3不同纤维化程度的肝组织中Smurf的表达3讨论肝纤维化是由各种致病因子作用所致肝内胶原结缔组织异常增生，以肝内弥漫性或局灶性细胞外基质(ECM)过度沉积为病理特征，可为渐变发展的漫长过程，是肝硬化必经的病理阶段，也是肝癌常见的伴随环节［2］。现在已证实，HSC的激活以及HSC激活后异常表达ECM是肝纤维化发生、发展的两个关键环节，而TGF－β1激活HSC并促进其合成ECM则被认为是肝纤维化发病机制的核心事件。近几年研究发现，在生物进化过程中，存在复杂而精细的调节机制参与上述TGF－β/Smad信号传递过程。其中，泛素蛋白酶体通路(UPP)因发现可以影响Smads信号的表达及调控而受到关注［3－6］。表5不同浓度硼替佐米作用后胶原表达的变?
【参考文献】：
期刊论文
[1]柴胡疏肝散对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响[J]. 尚立芝,王付,王琦,苗小玲,甘陈菲,张慧娜,王帮众. 中国实验方剂学杂志. 2015(12)
[2]结缔组织生长因子在放射性肝纤维化大鼠中的动态表达及其与肝星状细胞活化的关系[J]. 王云莲,艾力江·吐尔逊,艾尼瓦尔·艾木都拉,肖蕾,张月芬,杨颖,吴戈,程纬,包永星. 中华放射医学与防护杂志. 2014 (10)
[3]用于筛选和评价抑制Ⅰ型胶原α1链基因表达的抗肝纤维化药物双报告基因系统的构建及其有效性鉴定[J]. 张伟,代晓朋,于虹,王鲁燕,孙世惠,李军锋,周育森. 中华肝脏病杂志. 2014 (10)
[4]转化生长因子-β1疫苗对大鼠肝纤维化组织中胰岛素样生长因子结合蛋白的影响[J]. 徐叶进,陈凌,陈海君,付跃娟,郭玉香,盛棋跃,陈永平. 中华传染病杂志. 2014 (07)
[5]SnoN蛋白在肝纤维化大鼠肝组织中的表达及其意义[J]. 杨壮智,阳韬,陈永平. 医学研究杂志. 2011(09)
[6]肝星状细胞中的TGFβ信号转导通路[J]. 李丽,王宝恩. 世界华人消化杂志. 2007(23)
[7]Smad通路UPP依赖性的蛋白质降解机制[J]. 李靖,张悦,韩志芬,庞慧芳,李玉梅,刘克剑. 生命的化学. 2005(05)
[8]改良法分离大鼠肝星状细胞[J]. 赵文丽,姜庆久,吴春莲,陶富山. 局解手术学杂志. 2004(04)
本文编号：3499427
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