ZEB1在大鼠肝星状细胞激活及转分化中的作用
发布时间：2021-11-26 05:32
目的:本实验中利用ELISA、MTT和Western Blotting等实验检测的方法,探究乙醛刺激肝星状细胞活化过程中TGF-β信号通路相关的机制,并通过刺激肝星状细胞活化的方法来观察TGF-β信号通路的功能及效应。首先,乙醛刺激肝星状细胞株并设置不同的刺激时间,可通过MTT法来检测活化肝星状细胞的增殖水平;通过ELISA法测定肝星状细胞内纤维粘连素FN以及胶原蛋白I含量,证明乙醛能有效得刺激肝星状细胞株的活化,并比较不同刺激时间的差异。接着采用SB-431542特异性阻断TGF-β信号通路结合乙醛刺激HSC细胞,Western blotting检测HSC内ZEB1、α-SMA、Smad3和p-Smad3-S425的表达,以探究TGF-β信号通路相关机制。方法:①将细胞株分组为:（1）正常培养12小时,（2）正常培养24小时,（3）正常培养36小时,（4）TGF-β阻断正常培养24小时,（5）TGF-β阻断乙醛24小时刺激培养,（6）乙醛12小时刺激培养,（7）乙醛24小时刺激培养,（8）乙醛36小时刺激培养。培养相应组的细胞到细胞融合度为70%至80%时,用胎牛血清含量为0.4%的...
【文章来源】：西南医科大学四川省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SB-431542处理大鼠肝星状细胞12~36h后的生长活性Fig1ThegrowthactivitiesofrathepaticstellatecellsweretreatedwithSB-431542for12~36h.
图 2 SB-431542 处理后不同组别大鼠（Rat）肝星状细胞 12~36h 后的 TIMP Ⅰ和 FN 表达改变；A 为 SB-431542 阻断作用下 12~36h 后 TIMP Ⅰ表达的比较；B为 SB-431542 阻断作用下 12~36h 后 FN 表达的比较Fig 2 TIMP Ⅰa nd FN expressive changs of rat hepatic stellate cells were treatedwith SB-431542 for 12~36h; A TIMP Ⅰ expression of hepatic stellate cells wretreated with SB-431542 for 12~36h; B FN expression of hepatic stellate cells wretreated with SB-431542 for 12~36h.
HSC 经阻断剂预处理后再分组刺激后提取细胞总蛋白，然g 为各组上样量标准与预染蛋白 Marker 一起进行 SDS-PAGE分离，为了避免样品扩散加样速度要快，可在空白的孔中加样品缓冲液已避免边缘效应。跑 5%浓缩胶电压为 80V，跑胶电压为 120V，电泳至溴酚蓝前沿距凝胶底部 1cm 左右，为 2 至 3 小时左右。将分离胶取下后，用固定液（10%甲醇、、10%乙酸）固定 1 小时后，再用考马斯亮蓝 R-250 染色液分钟，之后与摇床上加入洗涤液（50%甲醇，50%蒸馏水）漂最后就得到了电泳图谱，结果见图 3。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝纤维化大鼠肝组织Smads基因表达状况及意义[J]. 吴晓玲,曾维政,蒋明德,秦建平,徐辉. 世界华人消化杂志. 2008(10)
[2]大鼠肝硬化形成过程中肝组织TGF-β1，Smad3，Smad7水平动态的变化[J]. 俞蕾敏,吕宾,李善高,斯淑英. 世界华人消化杂志. 2007(30)
[3]Transforming growth factor-β and fibrosis[J]. Franck Verrecchia,Alain Mauviel. World Journal of Gastroenterology. 2007(22)
[4]阻断转化生长因子—β1信号传导治疗大鼠实验性肝纤维化[J]. 徐新保,何振平,梁志清,冷希圣. 中华肝脏病杂志. 2004(05)
本文编号：3519498
【文章来源】：西南医科大学四川省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SB-431542处理大鼠肝星状细胞12~36h后的生长活性Fig1ThegrowthactivitiesofrathepaticstellatecellsweretreatedwithSB-431542for12~36h.
图 2 SB-431542 处理后不同组别大鼠（Rat）肝星状细胞 12~36h 后的 TIMP Ⅰ和 FN 表达改变；A 为 SB-431542 阻断作用下 12~36h 后 TIMP Ⅰ表达的比较；B为 SB-431542 阻断作用下 12~36h 后 FN 表达的比较Fig 2 TIMP Ⅰa nd FN expressive changs of rat hepatic stellate cells were treatedwith SB-431542 for 12~36h; A TIMP Ⅰ expression of hepatic stellate cells wretreated with SB-431542 for 12~36h; B FN expression of hepatic stellate cells wretreated with SB-431542 for 12~36h.
HSC 经阻断剂预处理后再分组刺激后提取细胞总蛋白，然g 为各组上样量标准与预染蛋白 Marker 一起进行 SDS-PAGE分离，为了避免样品扩散加样速度要快，可在空白的孔中加样品缓冲液已避免边缘效应。跑 5%浓缩胶电压为 80V，跑胶电压为 120V，电泳至溴酚蓝前沿距凝胶底部 1cm 左右，为 2 至 3 小时左右。将分离胶取下后，用固定液（10%甲醇、、10%乙酸）固定 1 小时后，再用考马斯亮蓝 R-250 染色液分钟，之后与摇床上加入洗涤液（50%甲醇，50%蒸馏水）漂最后就得到了电泳图谱，结果见图 3。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝纤维化大鼠肝组织Smads基因表达状况及意义[J]. 吴晓玲,曾维政,蒋明德,秦建平,徐辉. 世界华人消化杂志. 2008(10)
[2]大鼠肝硬化形成过程中肝组织TGF-β1，Smad3，Smad7水平动态的变化[J]. 俞蕾敏,吕宾,李善高,斯淑英. 世界华人消化杂志. 2007(30)
[3]Transforming growth factor-β and fibrosis[J]. Franck Verrecchia,Alain Mauviel. World Journal of Gastroenterology. 2007(22)
[4]阻断转化生长因子—β1信号传导治疗大鼠实验性肝纤维化[J]. 徐新保,何振平,梁志清,冷希圣. 中华肝脏病杂志. 2004(05)
本文编号：3519498
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