核苷（酸）类似物治疗慢性乙型肝炎过程中多重耐药HBV毒株的进化

发布时间：2021-11-28 12:10

　　目的研究核苷（酸）类似物（NAs）治疗慢性乙型肝炎（CHB）过程中多重耐药乙型肝炎病毒（HBV）株的演变规律及多重耐药形成机制。方法1)706例接受NAs抗病毒治疗过程中疗效不佳的CHB患者,对其血清HBV DNA进行PCR扩增后直接测序,分析其RT区序列特征;2)准种分析采用“PCR-克隆-测序”方法,对5例临床资料完整、具有代表性意义的患者的15份血清样本进行研究。并对其中4例患者连续血清样本进行动态监测,分析不同时间点血清标本HBV毒株准种特征。结果1)在不同NAs单药、序贯或联合治疗CHB过程中疗效不佳的706例患者中发现多重耐药25例。总的多重耐药检出率为3.5%,其中,LAM、ADV双重耐药检出率为72%,LAM、ADV、ETV三重耐药检出率为28%;2)多重耐药的出现不仅可导致病毒学反弹、生化学突破、肝炎复发,还可引起肝衰竭导致患者死亡;3)克隆分析发现准种的进化过程可分为以下三种模式:①在序贯治疗过程中,患者体内准种可由对单药耐药克隆进化到单药耐药克隆和多重耐药克隆的混合克隆;②序贯治疗过程中准种从单药耐药克隆全部演变为多重耐药克隆;③在药物的选择压力下,患者体内准种可... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HBVP基因RT区核苷类似物耐药突变位点示意图

结 果1. 多重耐药检出率及耐药特征706 例接受 NAs 抗病毒治疗过程中疗效不佳的 CHB 患者血清 HBV DNA 进行PCR 扩增后直接测序，分析其 RT 区序列特征，发现多重耐药 25 例，总的多重耐药检出率为 3.5%。患者体内可同时出现对左旋核苷组(LAM、LdT)、无环磷酸核苷组(ADV)双重耐药的毒株，检出率占总多重耐药检出率的 72%，还可同时出现对左旋核苷组(LAM、LdT)、无环磷酸核苷组(ADV)及环戊烷组(ETV)三组药物均耐药的毒株，检出率占总多重耐药检出率的 28% (表 2)。患者 RT 区部分氨基酸序列(169~250 位点)与 B、C 型野生型毒株序列比对图见图 2。

者中有 1 例既往未曾服用过 NAs，即预存多重耐药株(rtV207I+rtV214E)；LdT、LAM单药诱导多重耐药分别为 1 例、3 例；LAM-ADV、LAM-ETV 和 ADV-LdT 单药序贯诱导多重耐药分别为 9 例、2 例和 1 例；LAM-ADV-ETV 单药序贯诱导多重耐药 1 例；另有 2 例为 LAM-ADV 单药序贯耐药后予 LAM+ADV 或 LdT+ADV 联合治疗诱导多重耐药(详见表 2)。2. PCR-克隆-测序准种组成分析采用“PCR-克隆-测序”方法对 5 例临床资料较完整、具有代表性意义的患者的 15 份血清样本进行克隆分析。并对其中 4 例患者连续血清样本进行动态研究。HBV P 基因 RT 区目的片段经 PCR 扩增、纯化、连接和转化感受态细菌后，在 LB 平板上获得数十～数千个转化克隆，其中 90％以上为白色菌落(图 3)。每份标本随机挑选 10~25 个克隆行 PCR 定量检测，90％以上含有插入片段(图 4)，或进行普通 PCR 扩增后电泳鉴定，与 PCR 定量检测所得结论一致(图 5)。选取 PCR 验证阳性的克隆用于测序，共测序 193 个克隆。

【参考文献】：
期刊论文
[1]慢性乙型肝炎恩替卡韦治疗后的血清病毒学变化特征[J]. 邵幼林,赵卫峰,陈良云,吴金华,吴国祥,甘建和.  肝脏. 2009(04)
[2]阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎的疗效和耐药率[J]. 赵卫峰,邵幼林,陈良云,朱义玲,甘建和.  中华传染病杂志. 2008 (09)
[3]拉米夫定耐药HBV毒株RT区变异分析[J]. 赵卫峰,邵幼林,甘建和,陈良云,朱义玲,毛日成,张继明.  中国实用内科杂志. 2008(02)
[4]自然发生和拉米夫定诱导的乙型肝炎病毒逆转录酶区序列变异的特征[J]. 赵卫峰,邵幼林,陈良云,朱义玲,甘建和.  苏州大学学报(医学版). 2007(06)
[5]Antiviral therapy and resistance with hepatitis B virus infection[J]. Hans L Tillmann.  World Journal of Gastroenterology. 2007(01)
[6]慢性乙型肝炎防治指南[J].   中华内科杂志. 2006(02)



本文编号：3524403