3D多孔壳聚糖微球复合脂肪干细胞修复SD大鼠急性肝损伤研究

发布时间：2021-12-16 11:05

　　目的:1.体外制作孔径、孔隙率稳定的单纯3D多孔壳聚糖微球,然后在单纯的壳聚糖微球表面包被大豆蛋白比较两种微球孔径、孔隙率及与脂肪干细胞的细胞相容性;2.两种微球中选取与脂肪间充质干细胞相容性好的微球进行普通电镜扫描、CCK-8增殖实验,观察脂肪间充质干细胞在3D多孔壳聚糖微球上的增殖能力;3.将综合性能较好的3D多孔壳聚糖微球复合脂肪间充质干细胞与单纯脂肪间充质干细胞分别移植到大鼠体内修复SD大鼠急性肝损伤。方法:1.3D多孔壳聚糖微球及包被大豆蛋白由北京科技大学制作,将两种成品微球放在载物台上,喷金后扫描电镜观察其直径、孔径、孔隙率。将3D多孔壳聚糖微球⁶⁰GO消毒后将10mg微球在离心管内与50×10⁴脂肪间充质干细胞复合,复合2h后转入6孔板内37℃培养箱内培养。在第1、4、7天时取出微球进行活/死染色后在共聚焦显微镜下观察细胞扩增情况;2.取48h SD乳鼠腹股沟处脂肪组织,II型胶原酶磁珠离心法分离、培养、传代纯化大鼠脂肪间充质干细胞;流式细胞学检测及鉴定脂肪间充质干细胞的免疫表型及诱导其成脂、成骨、成软骨的多向分化潜能;3D多孔... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

倒置相差显微镜下动态观察脂肪间充质干细胞形态变化

安徽医科大学硕士学位论文1.4.2 脂肪间充质干细胞免疫学表型鉴定结果将 ADSCs 培养至 P2 代，经过抗体染色，流式细胞仪分后，结果显示：99.9%的细胞 CD29 阳性，97.6% 的细胞 CD90 阳性，而仅有 4.2% 的细胞 CD45 阳性，1.8% 的细胞 CD11b 阳性，证实培养的细胞为脂肪来源的 MSCs（见图 1.2）。

间的延长脂滴逐渐增多并相互融合，诱导完成后油红 O 染色可见细胞内脂滴成红色（见图 1.3A）。成骨诱导 3 d 后细胞逐渐成长梭形，10 d 左右细胞变为多边形并可见少量钙结节沉积。诱导21d后茜素红染色可见橘红色钙结节（见图1.3B）。成软骨诱导 3 d 后出现肉眼可见的团块，14 d 后细胞团渐成透明状，诱导 28 d后经脱水、石蜡包埋、脱蜡、脱水及染色后可见软骨组织内酸性黏多糖（见图1.3C）。图 1.3 脂肪间充质干细胞的成骨、成脂、成软骨诱导分化能力(倒置相差显微镜，×100)Figure 1.3 Osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation of adipose-derivedmesenchymal stem cells (inverted phase contrast microscope, ×100)图注：图中 A 为成脂诱导 8 d 后油红 O 染色，可见细胞内脂滴呈红色；B 为成骨诱导 21 d后茜素红染色，可见橘红色钙结节；C 为成软骨诱导 28 d 后阿利新蓝染色，可见软骨组织内酸性黏多糖

【参考文献】：
期刊论文
[1]3D打印丝素蛋白/胶原蛋白支架的制备及性能[J]. 孙凯,李瑞欣,范猛,李轶津,董宝康,李晖.  中国组织工程研究. 2017(02)
[2]Outcomes of liver transplantation for end-stage biliary disease: A comparative study with end-stage liver disease[J]. Yan-Hua Lai,Wei-Dong Duan,Qiang Yu,Sheng Ye,Nian-Jun Xiao,Dong-Xin Zhang,Zhi-Qiang Huang,Zhan-Yu Yang,Jia-Hong Dong.  World Journal of Gastroenterology. 2015(20)
[3]Bone marrow-derived mesenchymal stem cell therapy for decompensated liver cirrhosis:A meta-analysis[J]. Xing-Nan Pan,Lian-Qiu Zheng,Xiao-Huan Lai.  World Journal of Gastroenterology. 2014(38)



本文编号：3538027