ApoE敲除后通过AMPK/mTOR信号通路调控自噬促进小鼠非酒精性脂肪肝病的发生

发布时间：2021-12-23 10:59

　　背景:目前,非酒精性脂肪肝病发病机制被认为是由于肝脏脂肪的过度堆积而引起肝脏内发生氧化应激、炎症等反应造成的肝脏损伤。肝脏脂肪的过度堆积与脂肪的生成和代谢有关,因此大多数治疗NAFLD的药物都是以降低体内或者肝脏内脂肪含量为主,而由脂肪过度堆积至氧化应激、炎症的反应以及肝脏损伤的过程中机制尚不清楚。体内的脂肪代谢主要是在肝脏,脂肪在肝脏过度及累计会导致线粒体过度b-氧化和产生电子传输链酶活性,从而增加了更多的活性氧（ROS）并损害了线粒体功能;线粒体功能损伤会进一步促进非酒精性脂肪肝的发展和恶化。线粒体分裂和融合在维持功能性线粒体中起着关键作用。磷酸腺苷（AMP）活化蛋白激酶（AMPK）是调节线粒体质量控制的关键分子;AMPK激活后会使线粒体伸长/融合并增殖,从而维持和产生健康线粒体,并使线粒体产生更多的ATP和减少ROS的产生。同时,AMPK通过两种途径激活细胞自噬:自身磷酸化和抑制mTOR。自噬可以调节线粒体的分裂和融合维持线粒体的功能和质量,同时还可以调节脂质代谢,改善胰岛素抵抗和降低氧化应激,还可以通过减轻肝细胞损伤来保护肝细胞。载脂蛋白E（ApoE）是脂蛋白和调节血浆脂蛋白和... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ApoE敲除因小鼠鉴定泳道标号1、3、4、5、9、11、13、15、16、18、20、21为ApoE+/-，2、7、17、19、23为

安徽医科大学硕士学位论文29图2ApoE敲除后对小鼠血清中AST、ALT的影响（x±SE,n=6）。Fig.2EffectsofApoEdeficiencyonactivityofAST,ALTinserumfromdifferentgroups.Datawerepresentedasx±SE,n=6,***p<0.005vsWT-HFD;##p<0.01;###p<0.005vsApoE-/--HFD.4.3ApoE敲除后对小鼠脂质水平的影响4.3.1ApoE敲除后对小鼠血清中脂质水平的影响取各组样本中小鼠血清，使用TG、TC、LDL-C试剂盒检测脂质的水平。结果如图3所示，正常饮食WT小鼠和ApoE-/-小鼠血清中TG水平无显著差异，TC、LDL-C水平明显升高；高脂饮食组ApoE-/-小鼠较WT小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高，给予AICAR和Rapamycin干预后ApoE-/-小鼠TG、TC、LDL-C水平明显降低。上述结果表明，与WT-HFD组小鼠相比，高脂饮食可以致ApoE-/-小鼠血脂异常升高，给予AMPK激动剂和自噬激动剂可以挽救ApoE-/-小鼠血脂升高。图3ApoE敲除后对小鼠血清中TG、TC、LDL-C的影响（x±SE,n=6）。Fig.3EffectsofApoEdeficiencyonlevelsoflipidinserumfromdifferentgroups.Datawerepresentedasx±SE,n=6,***p<0.005vsWT-HFD;##p<0.01;###p<0.005vsApoE-/--HFD。4.3.2ApoE敲除后对小鼠肝脏中脂质水平的影响取各组样本中小鼠肝脏匀浆，使用TG、TC、LDL-C试剂盒检测脂质的水平。结果如图4所示：正常饮食WT小鼠和ApoE-/-小鼠肝脏中LDL-C水平无显著差异，TC、TG水平明显升高；高脂饮食组ApoE-/-小鼠较WT小鼠肝脏中中TG、TC、LDL-C水平显著升高，给予AICAR和Rapamycin干预后ApoE-/-小鼠TG、TC、

安徽医科大学硕士学位论文30LDL-C水平明显降低。上述结果表明，与WT-HFD组小鼠相比，高脂饮食可以致ApoE-/-小鼠肝脏脂质水平异常升高，给予AMPK激动剂和自噬激动可以挽救ApoE-/-小鼠肝脏脂质水平升高。图4ApoE敲除后对小鼠肝脏中TG、TC、LDL-C的影响（x±SE,n=6）。Fig.4EffectsofApoEdeficiencyonlevelsoflipidinliverfromdifferentgroups.Datawerepresentedasx±SE,n=6,**p<0.01,***p<0.005vsWT-HFD;##p<0.01,##p<0.01,##p<0.005vsApoE-/--HFD.4.4ApoE敲除后对小鼠肝脏组织病理学特征的影响4.4.1ApoE敲除后小鼠肝脏组织学特征的影响H&E染色显示，正常饮食组小鼠肝脏切片肝小叶结构完整，肝细胞排列规则有序；高脂饮食组WT小鼠肝细胞出现了脂肪变性，未见明显肝小叶，高脂饮食组ApoE-/-小鼠肝脏出现大量的脂肪空泡，肝细胞严重的空泡化和脂肪变性，给予AICAR和Rapamycin干预后ApoE-/-小鼠脂肪空泡、肝细胞空泡化和脂肪变性明显改善（图5）。上述结果表明，与WT-HFD组小鼠相比，高脂饮食可以诱导ApoE-/-小鼠肝脏发生脂肪变性、细胞空泡化等肝损伤，给予AMPK激动剂和自噬激动后可以改善ApoE-/-小鼠肝损伤。

【参考文献】：
期刊论文
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