肝星状细胞通过层粘连蛋白-整合素ɑvβ6途径参与肝细胞向肝祖细胞转化

发布时间：2021-12-25 05:10

　　【目的】在体外细胞水平证明肝硬化/慢性肝损伤时肝星状细胞促进肝细胞向肝祖细胞转化,并通过第二代高通量测序分析、ELISA、免疫组化、免疫荧光、转染等实验技术,在细胞水平探究肝星状细胞参与肝细胞向肝祖细胞转化的机制。【方法】第一,建立6WTAA、12WCCl₄两种肝硬化小鼠模型,通过天狼星红及HE染色评估肝硬化成模情况;第二,采用二步胶原酶灌注的方法提取肝硬化小鼠肝细胞及肝星状细胞,通过免疫荧光的方法对细胞纯度进行鉴定后,使用transwell共培养体系将肝细胞与活化肝星状细胞共培养,48小时后用免疫荧光技术检测肝细胞及肝祖细胞标志物的表达情况;第三,对肝星状细胞共培养组与对照组肝细胞进行第二代高通量测序分析,采用Poly A富集的方法在mRNA水平比较两组肝细胞中基因表达差异,并通过差异基因的KEGG富集分析,对各信号通路上的差异基因数目进行统计,提供可能在肝细胞向肝祖细胞转化过程中产生影响的信号通路。在所提供的前20个信号通路中,考虑到活化肝星状细胞分泌细胞外基质导致肝脏组织细胞外基质聚集,并结合前沿文献,我们选择ECM-receptor interaction... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

TAA模型组及对照组HE、天狼猩红染色100X

CCl4模型组及对照组HE、天狼猩红染色100X

放入细胞培养箱培养。次日用ALB抗体行免疫荧光染色对肝细胞进行鉴定；大约一周后，肝星状细胞活化，此时用αSMA抗体行细胞荧光检测，对活化的肝星状细胞进行鉴定。如下图2所示：90%以上肝细胞均表达ALB，95%以上肝星状细胞均表达αSMA，表明提取的原代细胞纯度足够，且培养一周后的肝星状细胞为活化状态。图2 肝细胞及活化的肝星状细胞鉴定 200X3.活化的肝星状细胞与肝细胞共培养结果：原代肝细胞种板后6小时左右，显微镜下观察肝细胞状态及是否贴壁。当肝细胞贴壁后，超净台内进行细胞换液，分为两组处理：一组为共培养组，即HSC+组：使用transwell小室结构，上室接种活化的肝星状细胞，肝星状细胞不能通过小室，但其


本文编号：3551845