乙型肝炎病毒HBsAg基因稳定转染Chang-Liver肝细胞系差异表达蛋白的研究
发布时间：2022-01-20 19:06
乙型肝炎病毒（HBV）感染是严重影响我国人民健康的重要传染病。可引起急性、慢性肝炎、肝硬化,并与肝癌的发生有密切的关系。目前,对于具体的HBV致病（癌）机制尚不十分明确。其中,HBV DNA整合于肝细胞基因组被认为是肝细胞损伤、HCC发生的主要机制之一。HBV是一种嗜肝部分双链DNA病毒,其基因组长约3.2kb,具有4个主要的开放读码框架（ORF）,分别命名为S、C、P、X区,HBsAg是由S区编码的表面蛋白,其编码区长度为681个核苷酸（nt）,有226个氨基酸（aa）。HBV表面抗原蛋白具有多种生物功能,并在部分整合型肝细胞内大量表达。为了解HBsAg整合入肝细胞基因组后,肝细胞内蛋白质表达谱变化,以进一步了解其对肝细胞生长代谢的影响,本研究成功构建了HBsAg的真核表达载体并建立稳定表达目的蛋白的Chang Liver-HBsAg-EGFP细胞系及空质粒对照的Chang Liver-EGFP细胞系,经双向凝胶电泳。应用ImageMaster 2DPaltinum 5.1软件（Amersham）对胶图进行斑点检测和匹配。选取差异蛋白质点,用MALDI-TOF—MS质谱进行分析,获得...
【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
pEGFP一Nl质粒及多克隆位点图
扩增条带位于0.5一Ikb之间bP位于预期目的条带的位置(图1一2)121000bP一 678bP~ 500bP一图1一 2HBV一S基因PCR扩增产物。 1.2PCR产物及pEGFP一Nl酶切产物纯化后，酶切产物纯化后电泳:符，且条带清晰无杂带。8%琼脂糖凝胶电泳，结果各目的条带位置大致与预期相(图l一3)洲n食护阮Orp三OFp.NI4。7kb，.skb乍.Okb8花bP
军医进修学院博士学位论文图1一3酶切纯化后的目的条带。从左至右依次为 IkbDNAladder、HBV一S、PEGFP一Nl。1.3目的质粒PEG即一N1一HBsAg的初步鉴定:酶切重组质粒pEGFP一Nl一HBsAg后得到两条带，其中一条带均位于0.5一Ikb之间，另一条分别位于4一skb之间，根据插入片断的大小正确，初步鉴定为目的质粒。pE6Fp.N门一S5kb4kb1.Skb1。okb8花bp图1一4重组质粒pEGFP一Nl一HBSAg酶切鉴定电泳图。1.4目的质粒的测序结果:对含有插入片段的重组质粒，进行测序。部分测序结果见下图。对测序所得的序列，在去除载体序列后，送至GenBank数据库，以BLAST软件进行序列相似性比较。我们得到了一个插入片段与HBv一S基因序列(91{929616)完全一致的重组质粒。(图1一5)
【参考文献】：
期刊论文
[1]Analysis of variabilities of serum proteomic spectra in patients with gastric cancer before and after operation[J]. Hong Ren, Ning Du, Heng-Tong Hu, Wei Tian, Zhi-Ping Deng, Department of Oncosurgery, First Hospital of Xi’ an Jiaotong University, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China Gang Liu, Jing-Sen Shi, Department of Hepatobiliary Surgery Laboratory, First Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’ an 710061, Shaanxi Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(17)
[2]Application of Proteomics in the Study of Tumor Metastasis[J]. Zhen Cai1, Jen-Fu Chiu2 , and Qing-Yu He2 * ,3 ,4 1Department of Surgery, Open Laboratory of Chemical Biology of the Institute of Molecular Technology for 2 Drug Discovery and Synthesis, Institute of Molecular Biology, Department of Chemistry, The University of 3 4 Hong Kong, Hong Kong, China.. Genomics Proteomics & Bioinformatics. 2004(03)
本文编号：3599359
【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
pEGFP一Nl质粒及多克隆位点图
扩增条带位于0.5一Ikb之间bP位于预期目的条带的位置(图1一2)121000bP一 678bP~ 500bP一图1一 2HBV一S基因PCR扩增产物。 1.2PCR产物及pEGFP一Nl酶切产物纯化后，酶切产物纯化后电泳:符，且条带清晰无杂带。8%琼脂糖凝胶电泳，结果各目的条带位置大致与预期相(图l一3)洲n食护阮Orp三OFp.NI4。7kb，.skb乍.Okb8花bP
军医进修学院博士学位论文图1一3酶切纯化后的目的条带。从左至右依次为 IkbDNAladder、HBV一S、PEGFP一Nl。1.3目的质粒PEG即一N1一HBsAg的初步鉴定:酶切重组质粒pEGFP一Nl一HBsAg后得到两条带，其中一条带均位于0.5一Ikb之间，另一条分别位于4一skb之间，根据插入片断的大小正确，初步鉴定为目的质粒。pE6Fp.N门一S5kb4kb1.Skb1。okb8花bp图1一4重组质粒pEGFP一Nl一HBSAg酶切鉴定电泳图。1.4目的质粒的测序结果:对含有插入片段的重组质粒，进行测序。部分测序结果见下图。对测序所得的序列，在去除载体序列后，送至GenBank数据库，以BLAST软件进行序列相似性比较。我们得到了一个插入片段与HBv一S基因序列(91{929616)完全一致的重组质粒。(图1一5)
【参考文献】：
期刊论文
[1]Analysis of variabilities of serum proteomic spectra in patients with gastric cancer before and after operation[J]. Hong Ren, Ning Du, Heng-Tong Hu, Wei Tian, Zhi-Ping Deng, Department of Oncosurgery, First Hospital of Xi’ an Jiaotong University, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China Gang Liu, Jing-Sen Shi, Department of Hepatobiliary Surgery Laboratory, First Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’ an 710061, Shaanxi Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(17)
[2]Application of Proteomics in the Study of Tumor Metastasis[J]. Zhen Cai1, Jen-Fu Chiu2 , and Qing-Yu He2 * ,3 ,4 1Department of Surgery, Open Laboratory of Chemical Biology of the Institute of Molecular Technology for 2 Drug Discovery and Synthesis, Institute of Molecular Biology, Department of Chemistry, The University of 3 4 Hong Kong, Hong Kong, China.. Genomics Proteomics & Bioinformatics. 2004(03)
本文编号：3599359
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