慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞干扰素及相关基因表达与干扰素疗效关系的研究

发布时间：2022-01-22 06:16

　　慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞干扰素及相关基因表达与干扰素疗效关系的研究丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）感染引起的丙型肝炎仍是严重危害人民健康的重要病毒性疾病。丙型肝炎的主要危害性在于患者易转变为慢性肝炎，并可进一步发展为肝癌（HCC）而死亡。目前Ⅰ型干扰素（下简称干扰素）已被临床广泛用于慢性丙型肝炎的治疗，但尚存在治疗效果有限等缺点。虽然国内外对HCV基因结构、功能、致病性及机体免疫应答等已进行了大量研究，但迄今仍不十分清楚HCV与干扰素在机体和细胞内如何相互作用以影响机体对干扰素的应答。本室曾对丙型肝炎病毒的有关基因序列进行研究，结果未发现相关氨基酸序列与中国丙型肝炎病人的干扰素疗效有关。因此，有必要进一步探讨机体因素与干扰素疗效的相关性。HCV感染机体后可诱生机体产生内源性干扰素，同时又可抵抗干扰素的作用。当使用外源性干扰素对病人进行治疗时，机体对干扰素的应答实际上是病毒，内源性干扰素系统与外源性干扰素在体内相互作用、平衡的结果。理论推测，HCV可能通过基因复制和蛋白表达对干扰素通路上的关键环节进行干预，使内源性干扰素产生不足、信号通路受阻或干扰素的作... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：151 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

RL一slRLS一M质粗构建示意图

图2pRL一TK质粒结构示意图癌细胞系Huh7细胞(本室保存)，RePllcon细胞(含H，能自行复制并表达HCV的非结构蛋白Ns3一4A一4B一SA)由本实验室构建保存M细胞培养基(Invitrogen公司)

生丝渔全叁签二部分慢性丙型肝炎患者P明cs‘型干扰幸及其合成相关基因的表达与干扰素疗效的关12.IRF一7pomoter活性检测条件的确定(1)IRF一7Promoter活性报告的特异性检测:将Huh7细胞传入24孔培养板中，密度为4x10勺孔。24h后换新鲜培液，在3个培养孔中分别转染荧光报告质粒PGVector、RL一8和甩一SM各250ng，同时各孔转入侧uc质粒50ng作为荧光检测内参。继续培养24h后，各孔换成无血清的DMEM培液，并加入500侧ml的IFN一，刺激18后，用PLB液100川裂解孔中细胞，离心后取上清进行荧光报告系统分析分析结果确认RL一8质粒中IRF一7Promoter活性特异地受IFN一a调控，而突变体空载对IFN一a无反应(见图4A)(2)IRF一7promoter活性报告的检测时间优化:RL一8质粒和Rlu。质粒共转Huh细胞，分别在IFN一a刺激oh，3h，sh，7h，12h和24h时检测荧光。结果显示，12h时I孙一7Promoter活性达到峰值(见图4B)，因此I盯一7promoter活性检测验中IFN一a刺激细胞的时间定为12h。


本文编号：3601692