HBV外膜蛋白结构域的稳定表达及治疗性抗体的研究
发布时间：2022-02-12 20:48
乙型病毒性肝炎，简称乙肝，是一种由乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，HBV）感染机体后所引起的疾病。乙肝流行面广、传染性强、易于慢性化和重症化，并且以人类为惟一宿主，因此对人类健康造成了很大伤害。HBV是一种嗜肝DNA病毒，主要存在于肝细胞内并损害肝细胞，引起肝细胞炎症、坏死、纤维化。HBV感染肝细胞的机理比较复杂，尚未完全明确。目前，控制乙型肝炎传播最为直接和有效的措施是接种乙肝疫苗。在HBV感染期间，肝细胞大量分泌20nm的外膜主蛋白颗粒，由细胞系或酵母方法制备的同样颗粒就是有效预防病毒感染的疫苗。乙肝疫苗经历了乙肝病毒外膜主蛋白（即S蛋白，HBsAg）重组疫苗；乙肝病毒外膜主蛋白、中蛋白（前S2蛋白+S蛋白）及大蛋白（前S1蛋白+前S2蛋白+S蛋白）重组疫苗；乙肝DNA疫苗等几个阶段。这些疫苗虽然能够有效地降低HBV母婴传播的发生率，然而在人体保护率、抗体应答水平、免疫持久性等方面还存在一定的问题。因此，寻找免疫原性更强的HBV疫苗成为当前研究的热点。HBV的外膜由开放读框S基因（S-ORF，核苷酸nt2854-0-832）编码合成，包括3种外膜成分：大蛋白（L）...
【文章来源】：河南科技大学河南省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HBsAg1-6的PCR结果
图 2-2 HBsAg1-6 的 PCR 结果Fig.2-2 Result of PCR with HBsAg1-6切鉴定的结果粒大片段条带和各大小不同的目的基因片段条带见图 2-3。从结S1-preS2-s(1-174)约 600bp、preS1-preS2-s(1-245)约 810bp、pre) 约 957bp 、 preS1-preS2-s(1-341) 约 1098bp 、 preS1-preS2-s(preS1-preS2-s(1-400)约 1275bp。
果入目的条带正确的阳性质粒送北京六合华大基因科技股份有限，测序结果用 DNAman 软件进行比对以验证目的片段序列建的表达载体序列测定的结果显示：重组载体 pcDNA3.1/P-preS2-HBsAg(1-6)-HA 测序验证不同长度的 preS1-preS2-HBs无突变，见附录 B。达载体 pcDNA3.1/Pro-UK-6*His-preS1-preS2-HBsAg(1-6)-H3.1（+）载体为哺乳动物稳定表达载体，全长 5.4kb，具有完结构和氨卞青霉素抗性，利用质粒自身的顺式成分将外源目的位点后经转染真核细胞 293 后可以获得表达，从而完成蛋白的
【参考文献】：
期刊论文
[1]Recent advances in hepatitis B virus research:A German point of view[J]. Dieter Glebe. World Journal of Gastroenterology. 2007(01)
[2]前S2蛋白与乙型肝炎病毒复制的关系[J]. 李琪玲. 现代中西医结合杂志. 2005(22)
[3]Study of transactivating effect of pre-S2 protein of hepatitis B virus and cloning of genes transactivated by pre-S2 protein with suppression subtractive hybridization[J]. Dong Ji, Guo-Feng Chen, the 7~(th) Department of Infectious Diseases, The 302 Hospital of PLA, Beijing 100039, China Jun Cheng, Jiang Guo, Beijing Ditan Hospital, Beijing 100011, China Yan Liu, Lin Wang, Center for Viral Hepatitis Research, Institute of Infectious Diseases, The 302 Hospital of PLA, Beijing 100039, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(35)
[4]生物制药的现状和未来（二）:发展趋势与希望[J]. 胡显文,陈惠鹏,汤仲明,马清钧. 中国生物工程杂志. 2005(01)
[5]Mechanism of intrauterine infection of hepatitis B virus[J]. Shu-Lin Zhang,Department of Infectious Disease,First Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710061,Shaanxi Province,ChinaYa-Fei Yue Gui-Qin Bai Lei Shi,Department of Gynecology and Obstetrics,First Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710061,Shaanxi Province,ChinaHui Jiang,Hospital of Women’s and Children’s Health Care,Zhaoqing 526060,Guangdong Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2004(03)
[6]Cloning of HBsAg-encoded genes in different vectors and their expression in eukaryotic cells[J]. Shan Qin Hong Tang Lian-San Zhao Fang He Yong Lin Li Liu Key Laboratory for Molecular Biology of Infectious Diseases of Sichuan Province,West China Hospital,Sichuan University,Chengdu 610041,Sichuan,China Xiao-Mei He Analytical and Testing Center,Sichuan University,Chengdu 610064,Sichuan,China Shan Qin Center for Discovery of Drugs and Diagnostics,Biomolecular Science Center,University of Central Florida.12722 Research Parkway,Orlando,Florida 32826.USA. World Journal of Gastroenterology. 2003(05)
[7]乙型肝炎病毒前S2蛋白结合蛋白基因的筛选[J]. 陆荫英,李克,王琳,刘妍,王业东,成军,张玲霞. 中华肝脏病杂志. 2003(01)
[8]乙型肝炎病毒基因组S区编码产物的检测及临床意义[J]. 黄学忠,吴祥,黄秀琴,潘虎. 临床肝胆病杂志. 2002(01)
[9]病毒基因组的反式调控及其在抗病毒基因治疗方案设计中的应用[J]. 成军. 国外医学.流行病学传染病学分册. 1994(06)
[10]前S2抗原抗体在HBV感染中的检测[J]. 何少璋,冯晫. 广州医药. 1994(01)
本文编号：3622354
【文章来源】：河南科技大学河南省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HBsAg1-6的PCR结果
图 2-2 HBsAg1-6 的 PCR 结果Fig.2-2 Result of PCR with HBsAg1-6切鉴定的结果粒大片段条带和各大小不同的目的基因片段条带见图 2-3。从结S1-preS2-s(1-174)约 600bp、preS1-preS2-s(1-245)约 810bp、pre) 约 957bp 、 preS1-preS2-s(1-341) 约 1098bp 、 preS1-preS2-s(preS1-preS2-s(1-400)约 1275bp。
果入目的条带正确的阳性质粒送北京六合华大基因科技股份有限，测序结果用 DNAman 软件进行比对以验证目的片段序列建的表达载体序列测定的结果显示：重组载体 pcDNA3.1/P-preS2-HBsAg(1-6)-HA 测序验证不同长度的 preS1-preS2-HBs无突变，见附录 B。达载体 pcDNA3.1/Pro-UK-6*His-preS1-preS2-HBsAg(1-6)-H3.1（+）载体为哺乳动物稳定表达载体，全长 5.4kb，具有完结构和氨卞青霉素抗性，利用质粒自身的顺式成分将外源目的位点后经转染真核细胞 293 后可以获得表达，从而完成蛋白的
【参考文献】：
期刊论文
[1]Recent advances in hepatitis B virus research:A German point of view[J]. Dieter Glebe. World Journal of Gastroenterology. 2007(01)
[2]前S2蛋白与乙型肝炎病毒复制的关系[J]. 李琪玲. 现代中西医结合杂志. 2005(22)
[3]Study of transactivating effect of pre-S2 protein of hepatitis B virus and cloning of genes transactivated by pre-S2 protein with suppression subtractive hybridization[J]. Dong Ji, Guo-Feng Chen, the 7~(th) Department of Infectious Diseases, The 302 Hospital of PLA, Beijing 100039, China Jun Cheng, Jiang Guo, Beijing Ditan Hospital, Beijing 100011, China Yan Liu, Lin Wang, Center for Viral Hepatitis Research, Institute of Infectious Diseases, The 302 Hospital of PLA, Beijing 100039, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(35)
[4]生物制药的现状和未来（二）:发展趋势与希望[J]. 胡显文,陈惠鹏,汤仲明,马清钧. 中国生物工程杂志. 2005(01)
[5]Mechanism of intrauterine infection of hepatitis B virus[J]. Shu-Lin Zhang,Department of Infectious Disease,First Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710061,Shaanxi Province,ChinaYa-Fei Yue Gui-Qin Bai Lei Shi,Department of Gynecology and Obstetrics,First Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710061,Shaanxi Province,ChinaHui Jiang,Hospital of Women’s and Children’s Health Care,Zhaoqing 526060,Guangdong Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2004(03)
[6]Cloning of HBsAg-encoded genes in different vectors and their expression in eukaryotic cells[J]. Shan Qin Hong Tang Lian-San Zhao Fang He Yong Lin Li Liu Key Laboratory for Molecular Biology of Infectious Diseases of Sichuan Province,West China Hospital,Sichuan University,Chengdu 610041,Sichuan,China Xiao-Mei He Analytical and Testing Center,Sichuan University,Chengdu 610064,Sichuan,China Shan Qin Center for Discovery of Drugs and Diagnostics,Biomolecular Science Center,University of Central Florida.12722 Research Parkway,Orlando,Florida 32826.USA. World Journal of Gastroenterology. 2003(05)
[7]乙型肝炎病毒前S2蛋白结合蛋白基因的筛选[J]. 陆荫英,李克,王琳,刘妍,王业东,成军,张玲霞. 中华肝脏病杂志. 2003(01)
[8]乙型肝炎病毒基因组S区编码产物的检测及临床意义[J]. 黄学忠,吴祥,黄秀琴,潘虎. 临床肝胆病杂志. 2002(01)
[9]病毒基因组的反式调控及其在抗病毒基因治疗方案设计中的应用[J]. 成军. 国外医学.流行病学传染病学分册. 1994(06)
[10]前S2抗原抗体在HBV感染中的检测[J]. 何少璋,冯晫. 广州医药. 1994(01)
本文编号：3622354
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