丙型肝炎病毒NS2TP基因调节机制的研究

发布时间：2022-02-15 02:17

　　目的:NS2TP基因是抑制性消减杂交技术（SSH）筛选出的HCV NS2反式激活的基因之一。本实验中,我们对HCV NS2反式激活NS2TP基因从翻译水平和转录水平进行验证,进而定位NS2TP基因启动子的核心区域,并初步探究了NS2TP基因的转录调节机制。方法:（1） HCV NS2对NS2TP基因反式激活作用的验证。首先,运用pcDNA3.1（–）-NS2表达载体转染HepG2细胞,以pcDNA3.1（–）为阴性对照组。提取总蛋白、总RNA,然后分别从翻译水平,即Western Blot实验,和转录水平,即进行Real-time PCR实验。分析和研究NS2对NS2TP基因的反式激活作用。（2） NS2TP基因启动子的活性分析与核心区的确定。首先,成功构建pGL4.10-NS2TP启动子双荧光素酶报告基因表达载体系统,运用构建的不同截短型载体转染HepG2细胞,在对启动子活性进行分析的基础上,实验确定了NS2TP基因启动子活性的核心区域,同时也分析了NS2对NS2TP基因启动子的调节作用。（3） NS2TP基因转录调节因子CREB作用启动子核心区的验证。运用生物信息学技术分析了启动子... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HCV基因组和NS2主要转录、翻译产物NS2TP基因是一个从抑制性消减杂交筛选出的HCVNS2反式激活基因，编码

NS2上调NS2TP表达

Real Time PCR 扩增反应采用了如图 2-3 显示的 SYBR Green I 嵌合荧光法，即在反应体系中加入与双链 DNA 结合便可发出荧光的荧光染料 SYBR Green I，通过检测 PCR 反应液中的荧光信号强度，可以对目的基因进行准确定量，同时还可以测定扩增的目的 DNA 片段的融解温度。

【参考文献】：
期刊论文
[1]PEG10 Activation by Co-Stimulation of CXCR5 and CCR7 Essentially Contributes to Resistance to Apoptosis in CD19+CD34+ B Cells from Patients with B Cell Lineage Acute and Chronic Lymphocytic Leukemia[J]. Chunsong Hu~1 Jei Xiong~(2,3) Linjei Zhang~1 Baojun Huang~1 Qiuping Zhang~3 Qun Li~1 Mingzhen Yang~4 Yaou Wu~1 Qun Wu~3 Qian Shen~1 Qingping Gao~5 Kejian Zhang~5 Zhimin Sun~6 Junyan Liu~3 Youxin Jin~2 Jinquan Tan~(1,3,7) ~1Department of Immunology,College of Basic Medical Sciences.Anhui Medical University,Hefei 230032,China.~2The Stat Key Laboratory of Molecular Biology.Institute of Biochemistry and Cell Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences.Chinese Academy of Science,Shanghai,China.~3Department of Immunology,and Sino-Danish Joint Laboratory of Immunology.Wuhan University School of Medicine.Wuhan 430071.China.~4Department of Hematology,The Affiliated University Hospital.Anhui Medical University,Hefei 230031.China.~5Department of Hematology,The Renmin and Zongnan University Hospital,Wuhan University,Wuhan 43007 1,China.~6Department of Hematology.The Provincial Hospital of Anhui.Hcfei 230020.China..  Cellular & Molecular Immunology. 2004(04)



本文编号：3625715