KP-2改善非酒精性脂肪肝炎的作用机制研究

发布时间：2022-02-24 01:24

　　近年来,由于全球肥胖病的流行,非酒精性脂肪肝炎（NASH）的患病率正逐年增长,这一疾病的特征是脂肪组织扩张,氧化应激的激活,炎症反应的增加以及不同程度的纤维化。NASH会增加肝脏相关的发病率和死亡率,并增加其他合并症的风险,由于诊断困难,易被忽视发展成为肝硬化甚至肝癌,对人类危害巨大。迄今为止,国际上治疗NASH的主要目标仍然是改善脂代谢并预防疾病的进展,但目前没有任何干预措施在NASH的治疗方面是完全有效的。这种情况下,开发新靶点新机制的NASH治疗药物显得尤为重要。本文主要围绕KP-2对NASH这一疾病的作用及机制展开研究,建立NASH体内外的小鼠模型与细胞模型,通过一系列技术手段验证了 KP-2对NASH的改善作用,并初步探究了其作用机制。KP-2作为一款高效的丁酰胆碱酯酶（BChE）抑制剂,在动物模型中可以抑制高脂饮食（HFD）导致的BChE活性增高,该结论明确了 KP-2的作用靶点。本课题通过高脂饮食诱导构建NASH动物模型,高脂喂养三个月后,连续腹腔注射KP-2（10mg/Kg）一个月。实验结果如下:1)高脂饮食（HFD）可导致小鼠体重大幅度增加,此外B超提示模型组小鼠肝脏... 

【文章来源】：广东工业大学广东省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
    1.1 非酒精性脂肪肝炎概述
    1.2 非酒精性脂肪肝炎治疗现状
        1.2.1 抗氧化剂
        1.2.2 针对代谢的NASH治疗
        1.2.3 针对炎症的NASH疗法
        1.2.4 针对细胞损伤的NASH治疗
        1.2.5 针对纤维化的NASH疗法
    1.3 KP-2及其靶点丁酰胆碱酯酶(BChE)研究现状
        1.3.1 丁酰胆碱酯酶BChE
        1.3.2 KP-2
        1.3.3 BChE与NASH的相关性
    1.4 非酒精性脂肪肝炎动物模型的研究进展及建立方法
    1.5 非酒精性脂肪肝炎细胞模型的研究进展及建立方法
    1.6 本课题的研究意义
第二章 非酒精性脂肪肝炎的动物模型
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 试剂及药品
    2.2 实验方法
        2.2.1 实验动物分组及处理
        2.2.2 动物组织的BChE活性检测
        2.2.3 高分辨率小动物超声影像系统检测
        2.2.4 石蜡切片的制备
        2.2.5 肝脏组织HE染色
        2.2.6 血清中TC含量的检测
        2.2.7 血清中TG含量的检测
        2.2.8 血清中LDL-C含量的检测
        2.2.9 血清中SOD活性的检测
        2.2.10 血清中MDA活性的检测
        2.2.11 谷丙转氨酶(ALT)的测定
        2.2.12 谷草转氨酶(AST)的测定
        2.2.13 肝脏组织脂肪含量的检测
        2.2.14 动物组织中白细胞介素1β(IL-1β)的含量测定
        2.2.15 动物组织中白细胞介素6 (IL-6)的含量测定
        2.2.16 统计分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 KP-2对BChE的抑制作用检测
        2.3.2 小动物活体成像检测NASH动物模型肝脏脂肪的堆积
        2.3.3 不同组小鼠的体重及肝重比
        2.3.4 不同组小鼠的肾周脂肪及附睾脂肪含量
        2.3.5 小鼠肝脏组织切片HE染色
        2.3.6 KP-2对小鼠血清中血脂及转氨酶的影响
        2.3.7 动物血清中氧化应激指标的检测
        2.3.8 KP-2对肝脏脂肪堆积的影响
        2.3.9 KP-2对动物模型炎症因子表达的影响
    2.4 讨论
第三章 非酒精性脂肪肝炎的细胞模型
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验细胞
        3.1.2 仪器设备
        3.1.3 试剂及耗材
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞的培养
        3.2.2 非酒精性脂肪肝细胞模型的构建
        3.2.3 细胞活率的检测
        3.2.4 细胞内脂肪含量的检测
        3.2.5 AML12细胞总RNA提取
        3.2.6 逆转录合成cDNA
        3.2.7 AML12细胞有氧代谢能力检测
        3.2.8 统计分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 不同浓度FFA对AML12细胞活率及脂肪堆积的影响
        3.3.2 CCK-8检测梯度浓度药物的毒性作用
        3.3.3 KP-2对NASH模型的细胞活力影响
        3.3.4 BChE敲除对NASH模型的细胞活力影响
        3.3.5 KP-2及BChE敲除对NASH模型中脂滴堆积的影响
        3.3.6 KP-2及BChE敲除可增强NASH模型下细胞的线粒体有氧代谢能力
    3.4 讨论
结论与展望
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Genetic factors that affect nonalcoholic fatty liver disease: A systematic clinical review[J]. Tyler J Severson,Siddesh Besur,Herbert L Bonkovsky.  World Journal of Gastroenterology. 2016(29)
[2]中国非酒精性脂肪性肝病诊疗指南（2010年修订版）[J]. 范建高.  中国医学前沿杂志(电子版). 2012(07)



本文编号：3641686