乙型肝炎病毒包膜蛋白前S1区结合蛋白的分离鉴定

发布时间：2022-06-28 08:24

　　目的通过对HepG2细胞膜上乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus, HBV）前S1区（preS1）结合蛋白的分离并进行质谱鉴定,以及对preS1与鉴定出的蛋白在细胞膜水平上和体外的相互作用进行研究,从而鉴定preS1在HepG2细胞膜上的结合蛋白,为继续深入探索乙型肝炎病毒的肝细胞膜受体进而揭示HBV的入侵机制打下基础。策略与方法1. HepG2细胞膜上preS1结合蛋白的分离:利用基因重组技术将HBV preS1基因与GST标签在原核表达系统中融合表达;以融合蛋白GST-preS1为探针蛋白,与生物素标记膜蛋白的HepG2全细胞裂解液孵育,利用pull down技术分离HepG2细胞膜上与preS1结合的蛋白。2.对分离出的preS1结合蛋白进行质谱鉴定:利用液相色谱/质谱联用离子阱质谱仪进行质谱分析,仪器根据质谱分析获得的肽序列谱图自动进行数据库搜索,采用Spectrum Mill proteomics software在SwissPort数据库中搜索针对人的序列,通过预设条件的筛选从而鉴定出相应蛋白。3.对鉴定出的蛋白进行原核表达:从数据库中获得目的蛋白的基因序列,利... 

【文章页数】：96 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英汉缩略语名词对照
摘要
ABSTRACT
前言
    参考文献
第一部分 HEPG2 细胞膜上 HBV 包膜蛋白前 S1 区结合蛋白的分离
    1 材料与方法
    2 实验结果
    3 讨论
    参考文献
第二部分 前 S1 区结合蛋白的质谱鉴定
    1 材料与方法
    2 实验结果
    3 讨论
    参考文献
第三部分 前 S1 区结合蛋白的原核表达与纯化
    1 材料与方法
    2 实验结果
    3 讨论
    参考文献
第四部分 GRP78 与 PRES1 相互作用分析
    第一节 FRET 验证细胞膜上 PRES1 与 GRP78 的结合
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
        参考文献
    第二节 GRP78 与 PRES1 体外相互作用分析
        1 材料与方法
        2 实验结果
        3 讨论
        参考文献
全文总结
文献综述
参考文献
致谢
攻读博士学位期间发表论文
攻读学位期间参加学术会议


【参考文献】：
期刊论文
[1]Viral and cellular determinants involved in hepadnaviral entry[J]. Dieter Glebe,Stephan Urban.  World Journal of Gastroenterology. 2007(01)
[2]Expression and purification of the complete PreS region of hepatitis B Virus[J]. Qiang Deng, Yu-Ying Kong, You-Hua Xie, Yuan Wang, State Key Laboratory of Molecular Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes of Life Science, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China Qiang Deng, You-Hua Xie, Yuan Wang, Sino-France Center for Life Science and Genome Research, Shanghai 200031, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(20)
[3]FRET技术及其在蛋白质-蛋白质分子相互作用研究中的应用[J]. 王进军,陈小川,邢达.  生物化学与生物物理进展. 2003(06)

博士论文
[1]乙型肝炎病毒包膜蛋白受体的分离及其识别位点的鉴定[D]. 张君.重庆医科大学 2007



本文编号：3653889