肾母细胞瘤过度表达基因对大鼠肝星状细胞生物学行为的影响

发布时间：2022-07-03 16:02

　　目的:构建能表达靶向肾母细胞瘤过度表达基因（NOV）的小干扰RNA（siRNA）的重组质粒,研究NOV对大鼠肝星状细胞（HSC）活化、增殖、凋亡、分泌细胞外基质（ECM）的影响方法:以NOV为目的基因,以质粒psiRNA- hHlneo为载体,构建能在真核细胞中表达的靶向NOV的siRNA的重组质粒psiRNA （psiRNA1,2,3）和阴性对照重组质粒pconsiRNA.限制性酶切和测序鉴定构建成功后,脂质体介导重组质粒转染HSC,依据转染质粒的不同将HSC分为psiRNA1组、psiRNA2组、psiRNA3组、阴性对照pconsiRNA组,并以未转染重组质粒的HSC为空白对照组.半定量RT-PCR检测HSC的NOV、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达情况,Western blot检测α-SMA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡.结果:限制性酶切和测序鉴定表明成功构建了NOVsiRNA表达质粒:与阴性对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内NOV、α-SMA的mRNA表达水平下降（73.0% vs 23.2%,51.4... 

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【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠肝星状细胞系的建立及其生物学特性的研究[J]. 冷希圣,翁山耕,李涛,魏玉华,彭吉润,杜如昱.  解剖学报. 2003(03)



本文编号：3655190