康复新液调节TGF-β1/Smads信号通路抑制炎症相关性肠纤维化作用研究

发布时间：2022-07-12 12:56

　　背景:肠纤维化是炎症性肠病的最为常见的并发症,机制不明,且易导致肠腔狭窄,手术仍是目前治疗目前狭窄的唯一手段,因而在肠纤维化形成早期使用药物干预,成为预防或延缓疾病进程的重要手段,但目前临床上尚未有理想的药物。康复新液（KFX）是美洲大蠊干燥虫体提取物,近年来研究发现,该药具有抗炎、抗纤维化及良好的促进组织愈合等作用,不良反应低。鉴于临床上肠纤维化多由长期反复炎症损伤所引发,因而,康复新液在防治肠纤维化方面的作用研究具有一定探讨价值。目的:本研究通过体内、体外实验,探讨KFX在炎症相关性肠纤维化模型中的作用及其可能的机制。方法:1、100只雌性BALB/c小鼠分为正常组,TNBS模型组,KFX（0.1 ml/20g、0.2 ml/20g、0.4 ml/20g）组,5-氨基水杨酸组（5-ASA组,40 mg/kg）。除正常组外,其余各组小鼠每周灌肠给予TNBS+45%乙醇进行造模,TNBS剂量分别为1.0mg,1.5 mg和2.0 mg,连续灌肠6周建立炎症相关性肠纤维化模型,每周灌肠一次,每个剂量TNBS各给予两周。ELISA法检测血清IL-10和IL-17水平;HE染色法和Masss... 

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【学位级别】：硕士

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1 引言
第一部分 康复新液对TNBS所致的肠纤维化的作用以及TGF-β1/Smads通路的影响
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要药品与试剂
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 动物的模型建立和给药
        2.2 小鼠体重及肠重指标
        2.3 H&E染色观察小鼠肠道病理学变化
        2.4 Masson染色观察肠组织纤维化程度
        2.5 免疫组化法检测肠组织中α-SMA的表达
        2.6 酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清中IL-10、IL-17 的含量
        2.7 Real time-PCR测定组织中mRNA表达
        2.8 Western Blot免疫印迹法测定蛋白表达
    3 统计学处理
第二部分 康复新液对TGF-β1 诱导的CCD-18Co细胞中纤维化基因与蛋白表达的影响
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 主要药品与试剂
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 溶液配制
        2.2 细胞的培养、传代、冻存和复苏
        2.3 观察不同浓度TGF-β1 作用于CCD-18Co细胞纤维化状态
        2.4 MTT实验
        2.5 细胞实验造模及分组
        2.6 Real time-PCR实验检测细胞中α-SMA和 Collagen I的 mRNA表达
        2.7 Western blot法检测细胞中α-SMA和 Collagen I蛋白表达
    3 统计学处理
4 结果
    4.1 KFX对小鼠的一般情况和肠道形态学影响
    4.2 KFX对小鼠肠道病理学影响
    4.3 KFX对 TNBS诱导的肠纤维化小鼠血清中IL-10和IL-17 水平的影响
    4.4 KFX对 TNBS诱导的肠纤维化小鼠肠道纤维化指标的影响
    4.5 CCD-18Co细胞纤维化状态
    4.6 MTT法筛选KFX对 CCD-18Co细胞的作用浓度
    4.7 KFX对 TGF-β1 诱导的CCD-18Co细胞中α-SMA和 Collagen I的mRNA和蛋白表达的影响
    4.8 KFX对 TNBS诱导的肠纤维化小鼠肠组织中TGF-β1/Smads通路关键分子mRNA和蛋白表达的影响
5 讨论
6 结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
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[3]美洲大蠊提取物含药血清体外抗肝纤维化的实验研究[J]. 李春艳,陈衍杰,李树楠,刘光明,赖泳.  中药材. 2013(05)
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[8]康复新液对家兔创伤愈合的影响[J]. 李珊瑚,李勇敏,彭淑珍.  临床和实验医学杂志. 2006(06)



本文编号：3659165