二氢杨梅素对葡聚糖硫酸钠结肠炎小鼠肠黏膜屏障的作用及机制研究

发布时间：2022-07-20 18:05

　　目的:探索二氢杨梅素对实验性结肠炎小鼠肠黏膜屏障的作用及可能的机制。方法:将50只C57BL/6小鼠随机分为五组:正常对照组,葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium,DSS）组,DSS+20mg/kg DHM（二氢杨梅素）组,DSS+40mg/kg DHM组,柳氮磺吡啶（Salazosulfapyridine,SASP）组。正常对照组自由饮用PBS 7天,其余各组自由饮用由PBS配制的2.5%DSS溶液7天,之后正常对照组及DSS组给予PBS灌胃7天,余各组分别给予不同浓度DHM或SASP灌胃治疗7天,共14天。期间每天记录各组小鼠大便性状、体重、便血等情况计算DAI,第15天水合氯醛麻醉后采集门静脉血,颈椎脱臼法处死小鼠,收集各组小鼠结肠组织。运用HE（Hematoxylin and eosin）染色法检测小鼠肠道组织损伤情况;通过免疫组化的方法检测紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-2、Occludin的表达水平;采用TUNEL检测试剂盒和免疫印迹的两种方法检测肠道细胞凋亡数量及凋亡相关蛋白BAX、Bcl-2、Caspase-3表达水平;通过检测小鼠门静脉血中... 

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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引言
第一章 实验材料与仪器
    1.1 实验材料
    1.2 实验仪器
第二章 实验方法
    2.1 DSS结肠炎小鼠模型构建
    2.2 免疫印迹法检测 DHM 对凋亡相关蛋白 Caspase3、BAX、Bcl-2 表达的影响
        2.2.1 蛋白提取、浓度测定
        2.2.2 电泳
        2.2.3 转膜
        2.2.4 封闭
        2.2.5 曝光、分析
    2.3 肠组织切片HE染色并组织学评分
    2.4 肠组织切片免疫组化染色
    2.5 TUNEL染色
    2.6 门静脉血中细菌活力检测
        2.6.1.门静脉血采集
        2.6.2.细菌活力检测
        2.6.3 细菌计数
    2.7 DHM保护DSS损害的结肠炎小鼠肠黏膜屏障完整性
    2.8 MTT实验检测LPS和DHM对IEC6细胞增殖的影响
    2.9 反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)
        2.9.1.提取RNA
        2.9.2.逆转录RNA成c DNA
        2.9.3.PCR反应
第三章 实验结果
    3.1 DHM对结肠炎小鼠DAI及体重的影响
    3.2 DHM对结肠炎小鼠肠道长度及组织学的影响
    3.3 DHM促进肠道紧密连接蛋白的表达
    3.4 DHM对肠道细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响
    3.5 DHM减少结肠炎小鼠门静脉血中细菌活力
    3.6.DHM保护DSS引起的结肠炎小鼠肠黏膜屏障完整性破坏
    3.7.DHM对肠上皮细胞增殖的影响
    3.8.LPS对肠上皮细胞增殖的影响
    3.9.DHM对炎性条件下肠上皮细胞炎性因子分泌的影响
第四章 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
在学期间研究成果
致谢



本文编号：3664488