溃疡性结肠炎中PI3K/AKT信号对NHERF4调控SLC26A3表达的影响

发布时间：2022-08-01 21:05

　　目的:本研究利用细胞学实验,选择Caco2细胞,稳定转染NHERF4后,运用PI3K/AKT信号激动剂及抑制剂上调和下调PI3K/AKT信号通路,了解NHERF4表达和细胞内定位,观察分析NHERF4对PI3K/AKT-SLC26A3作用的影响,从而分析UC中NHERF4对SLC26A3表达的影响奠定细胞学实验基础。方法:1.利用慢病毒LV-NHERF4感染Caco-2细胞,经嘌呤霉素筛后,获得实验所需的稳定转染NHERF4的Caco-2细胞株。2.利用未转染NHERF4的Caco-2细胞和转染NHERF4质粒的Caco-2细胞,分别给予不同浓度的IGF-1试剂,加药浓度依次为0.1ug/m L、0.2ug/m L、0.4ug/m L、1ug/m L、2ug/m L、3ug/m L,观察NHERF4和SLC26A3蛋白表达量,分析NHERF4对PI3K/AKT-SLC26A3作用的影响。3.利用未转染NHERF4的Caco-2细胞和转染NHERF4质粒的Caco-2细胞,分别给予不同浓度的LY294002试剂,加药浓度依次为1u M、2u M、3u M、4u M、5u M、6u M。观... 

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略语表
前言
第一部分 利用慢病毒载体构建NHERF4 过表达Caco-2 稳定细胞株
    一、实验材料
        1.1 细胞株和NHERF4 慢病毒载体
        1.2 主要试剂
        1.3 主要实验仪器
        1.4 主要溶液及配制方法
    二、实验方法
        2.1 慢病毒LV-NHERF4 载体的构建及鉴定
        2.2 Caco-2 细胞培养
        2.3 Caco-2 细胞计数
        2.4 慢病毒的感染
        2.5 倒置荧光显微镜下观察NHERF4 感染效率及定位表达
    三、实验结果
    四、讨论
第二部分 PI3K/AKT信号通路对NHERF4及SLC26A3 的影响
    一、实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 主要试剂
        1.3 主要实验仪器
        1.4 主要实验试剂
    二、实验方法
        2.1 Caco-2 细胞培养
        2.2 实验分组
        2.3 Western blot法检测Caco-2 细胞中NHERF4及SLC26A3 蛋白的表达
    三、实验结果
    四、讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
作者简介
附件


【参考文献】：
期刊论文
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[3]系统性红斑狼疮发病机制的研究进展[J]. 吴海竞,陆前进.  皮肤科学通报. 2018(03)
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本文编号：3668174