卵泡抑素样蛋白1在肝星状细胞衰老过程中作用机制的研究

发布时间：2022-12-11 17:47

　　肝纤维化是由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生,长期发展会形成肝硬化甚至肝癌,目前仍缺乏有效治疗方法。肝星状细胞（HSC）在病理条件下被激活为活化HSC（aHSC）,是肝纤维化过程中产生细胞外基质（ECM）的主要细胞,去除致病因子后肝纤维化过程可逆,其转分化为失活细胞或发生细胞衰老/凋亡从而被体内免疫细胞清除。卵泡抑素样蛋白1（Fstl1）具有多种生物学功能,我们前期研究发现其在肝纤维化中有重要作用,主要表达在HSC中并影响其转分化,本论文进一步研究Fstl1在肝纤维化消退过程的作用及对HSC衰老的影响,主要研究内容及结论如下:（1）我们采用每周两次、连续四周注射四氯化碳建立小鼠肝纤维化模型,停止造模恢复30天后,aHSC分子标记α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和ECM主要蛋白Ⅰ型胶原（Col1）表达明显下调,接近正常组水平,同时发现Fstl1在此过程表达下调。半倍缺乏Fstl1小鼠(Fstl1^+/-)与野生型小鼠((Fstl1^+/-)小鼠相比,其肝纤维化程度较轻,且恢复更快。而在尾静脉注射过表达FSTL1腺病毒的小鼠肝脏中,衰老相关基因如... 

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
    1.1 肝纤维化
        1.1.1 肝纤维化的基本介绍
        1.1.2 肝纤维化的发生机制
    1.2 肝纤维化的逆转
        1.2.1 肝纤维化的消退
        1.2.2 活化的肝星状细胞衰老
        1.2.3 活化的肝星状细胞凋亡
        1.2.4 活化的肝星状细胞转分化
    1.3 Fstl1简介及功能
        1.3.1 Fstl1的基因及蛋白结构
        1.3.2 Fstl1对细胞生长的影响
        1.3.3 Fstl1对细胞衰老凋亡的影响
        1.3.4 Fstl1对脏器纤维化的影响
    1.4 立题依据及研究内容
        1.4.1 立题依据
        1.4.2 研究内容
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞株
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 动物建模
        2.2.2 细胞的培养
        2.2.3 原代肝星状细胞的分离鉴定及培养
        2.2.4 细胞衰老模型构建
        2.2.5 Fstl1 siRNA敲低细胞实验
        2.2.6 Fstl1过表达细胞实验
        2.2.7 小室迁移实验
        2.2.8 RNA提取(Trizol法)
        2.2.9 逆转录-cDNA的制备
        2.2.10 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)
        2.2.11 β-gal染色
        2.2.12 Fstl1-creER;Rosa26-tdtomato小鼠基因型鉴定
        2.2.13 病理样品制备
        2.2.14 免疫组化
        2.2.15 单细胞测序
        2.2.16 统计学方法
第三章 结果与讨论
    3.1 Fstl1基因对于CCl4诱导小鼠肝纤维化进展及消退的影响
        3.1.1 Fstl1半倍缺失影响小鼠肝脏中纤维化相关基因的表达
        3.1.2 Fstl1半倍缺失影响小鼠肝脏中衰老凋亡相关基因的表达
        3.1.3 体内肝脏过表达Fstl1对于衰老凋亡相关基因的影响
        3.1.4 凋亡衰老相关蛋白在Fstl1~(+/-)小鼠肝脏组织中的表达情况
        3.1.5 原代分离Fstl1谱系追踪小鼠肝星状细胞
    3.2 Fstl1对于肝星状细胞体外分化的影响
        3.2.1 依托泊甙诱导人肝星状细胞LX-2衰老模型的建立
        3.2.2 敲低Fstl1对于肝星状细胞体外分化的影响
        3.2.3 过表达Fstl1对肝星状细胞体外分化的影响
        3.2.4 小鼠原代肝星状细胞的分离
        3.2.5 小鼠原代肝星状细胞体外活化过程中纤维化相关基因的表达变化
        3.2.6 敲低Fstl1对小鼠原代肝星状细胞体外分化的影响
        3.2.7 Fstl1对小鼠原代肝星状细胞迁移的影响
    3.3 敲低Fstl1对于小鼠原代HSC单细胞转录水平的影响
        3.3.1 基于Cell Ranger算法的敲低Fstl1后的分组及表达情况
        3.3.2 基于Cell Ranger(graph-based)算法的单细胞群的分类情况
        3.3.3 基于Cell ranger算法的敲低Fstl1后肝星状细胞功能富集分析
主要结论与展望
    主要结论
    展望
致谢
参考文献
附录 :作者在攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Metformin attenuates motility,contraction,and fibrogenic response of hepatic stellate cells in vivo and in vitro by activating AMP-activated protein kinase[J]. Zhen Li,Qian Ding,Li-Ping Ling,Ying Wu,Dong-Xiao Meng,Xiao Li,Chun-Qing Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2018(07)



本文编号：3719222