体外三维肝脏炎症模型的建立及应用

发布时间：2022-12-18 14:42

　　肝脏炎症是增加各类药物产生肝毒性的重要因素之一,但是在药物上市之前,临床上通常不对其进行评估,因此建立一种合适可靠的人类体外肝样模型对合理评价药物毒性十分关键。本研究利用了球形板体外3D培养技术,选用了三种人源化细胞分别为HepaRG细胞、肝星形细胞（HSC）以及肝库普弗（KC）细胞进行体外细胞共培养,保持HepaRG细胞和HSC数量相同,同时调节不同的KC细胞数量以建立三种体外3D共培养模型,分别命名为0%KCs、10%KCs（模拟人正常肝脏）和40%KCs（模拟人肝脏发炎）,模型建成后对其进行17天的肝脏特异性功能的评价和细胞形态观察。结果显示,利用球形超低吸附培养板培养出来的3D肝脏小球,球体居中,形成球体的时间快,无需转移至新的培养板中且易于进行药物处理。建立的三种体外3D共培养模型均随着时间的推移而逐渐增大,直径最大可达到500-600μm,均能在17天内保持高水平白蛋白、总胆汁酸的分泌以及尿素的合成,表明我们在体外所建立的3D小球可以长时间保留肝脏的特异性功能。随后我们评估了3D小球中KC细胞的功能。脂多糖（LPS）是一种细菌内毒素,它可刺激机体产生白介素和肿瘤坏死因子等,... 

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 药物性肝损伤
        1.1.1 体内模型
        1.1.2 体外模型
    1.2 体外3D细胞培养
        1.2.1 3D细胞培养的发展历史
        1.2.2 3D细胞培养方式
        1.2.3 3D细胞培养的应用
    1.3 肝脏中的主要细胞类型
        1.3.1 肝细胞
        1.3.2 肝星形细胞
        1.3.3 库普弗细胞
        1.3.4 肝炎症模型的研究现状
    1.4 肝脏中的炎症
        1.4.1 药物性肝损伤与炎症反应
    1.5 研究的目的及意义
        1.5.1 研究的目的
        1.5.2 研究的意义
第2章 三维(3D)肝脏模型的建立
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 三种3D共培养模型的建立
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 HepaRG细胞
        2.3.2 HSC细胞
        2.3.3 三种3D细胞模型的建立
    2.4 本章小结
第3章 三种肝脏3D模型的评价
    3.1 实验材料与仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验过程
        3.2.1 白蛋白(Albumin)检测
        3.2.2 总胆汁酸(TBA)检测
        3.2.3 尿素(Urea)检测
        3.2.4 总蛋白(BCA)浓度检测
        3.2.5 RT-PCR基因表达分析
        3.2.6炎症反应与药物毒性实验
        3.2.7 炎症标志物的检测
        3.2.8 氢化可的松对LPS介导的反应的影响
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 白蛋白检测
        3.3.2 总胆汁酸检测
        3.3.3 尿素检测
        3.3.4 BCA检测
        3.3.5 RT-PCR检测
        3.3.6 炎症标志物检测
第4章 三维(3D)肝脏模型的应用
    4.1 细胞因子的产生和细胞毒性
        4.1.1 对乙酰氨基酚作用于两种模型下的毒性特点
        4.1.2 异烟肼作用于两种模型下的毒性特点
        4.1.3 盐酸胺碘酮作用于两种模型下的毒性特点
        4.1.4 苯妥英钠作用于两种模型下的毒性特点
    4.2 氢化可的松在LPS介导的炎症模型下的抗炎作用
        4.2.1 两种模型中氢化可的松对药物对乙酰氨基酚的抗炎作用
        4.2.2 两种模型中氢化可的松对药物异烟肼的抗炎作用
        4.2.3 两种模型中氢化可的松对药物盐酸胺碘酮的抗炎作用
        4.2.4 两种模型中氢化可的松对药物苯妥英钠的抗炎作用
    4.3 本章小结
全文总结
参考文献
作者简介
致谢



本文编号：3722237