调控Wnt/beta-catenin信号途径改善衰老肠干细胞分化障碍的研究

发布时间：2023-01-12 21:36

　　目的:干细胞衰老是衰老相关疾病发生的基础。随着衰老的发生,老年人的肠道稳态难以维持,肠道疾病如肠道肿瘤的发生率急剧增加,肠道受损后修复再生能力减弱,这表明衰老肠干细胞（Intestinal Stem Cells,ISCs）的核心功能发生改变。然而,目前对自然衰老过程中肠干细胞自我更新与分化等核心功能到底有何异常及其调控机制尚不清楚。本研究主要研究衰老肠干细胞自我更新与分化功能的作用,从而探索肠干细胞衰老的机制及其延缓衰老的途径。方法:取24月龄（old）和2月龄（young）小鼠的全小肠进行隐窝分离,在标准培养体系中进行隐窝培养。分别于第7天和第10天观察隐窝培养的表型、统计肠类器官的生长总量,并取培养第7天的ISCs通过qRT-PCR技术对ISCs分化基因（including Alpi、Atoh1、Defa24、Chga）表达水平及Wnt信号靶基因（Axin2、Ascl2）表达水平进行检测。在第10天进行传代培养,以及传代培养后第4天观察隐窝培养表型、统计肠类器官生长总量。通过观察隐窝培养的表型、肠类器官生长总量的统计及qRT-PCR结果分析衰老小鼠ISCs的分化功能,及与年轻小鼠I... 

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 基本材料
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 qRT-PCR引物序列
    2.2 实验方法与步骤
        2.2.1 肠隐窝分离
        2.2.2 肠隐窝培养
        2.2.3 RNA的提取与c DNA的合成
        2.2.4 qRT-PCR
        2.2.5 统计学方法
第3章 结果
    3.1 衰老ISCs在标准培养体系培养
        3.1.1 老年小鼠ISCs在标准培养体系的原代培养
        3.1.2 老年小鼠ISCs在标准培养体系的传代培养
        3.1.3 标准培养体系中老年小鼠ISCs的 Wnt信号水平
    3.2 降低培养体系中R-spondin-1 后衰老ISCs的培养
        3.2.1 降低培养体系中R-spondin-1 浓度后衰老ISCs的 Wnt信号水平
        3.2.2 降低培养体系中R-spondin-1 浓度后衰老ISCs的原代培养
        3.2.3 降低培养体系中R-spondin-1 浓度后衰老ISCs的传代培养
    3.3 在培养体系中添加Wnt3a后衰老ISCs的培养
第4章 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3730486