Gas6在LPS/D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤中作用及其机制研究

发布时间：2023-02-05 13:59

　　研究背景肝脏在脓毒症中是一把双刃剑,一方面介导免疫应答清除细菌和毒素,另一方面引起炎症、免疫抑制和器官损伤。尽管脓毒症的治疗取得了进展,但其发病率和死亡率仍然很高[1]。脓毒症后的肝功能障碍是脓毒症患者死亡的独立危险因素。改善肝功能可降低脓毒症患者的发病率和死亡率[2-5]。生长停滞特异性蛋白6(Growth arrest-specific protein 6,Gas6)是一种维生素K依赖的分泌型蛋白,由678个氨基酸组成,相对分子质量为75k Da。它与蛋白S(Protein S,Pro S)具有43%的相同序列。其为酪氨酸激酶亚家族成员Tyro3、Axl、Mer的配体[6]。Gas6具有广泛的抑制炎症的功能,一方面降低TLRs信号,另一方面在炎症恢复阶段参与巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬[7]。有大量研究表明Gas6/TAM可通过直接抑制TLRs,抑制炎症相关基因TNF-α、IL-1β、IFN-α和NF-κB的表达而发挥抗炎作用。本项目通过LPS/D-Gal N复制小鼠急性肝损伤模型,通过分子生物学手段探究Gas6对LPS/D-Gal N急性肝损伤的作用及机制。研究内容第一部分:LPS/...

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 脓毒症急性肝损伤小鼠模型的构建及Gas6的表达
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料与试剂
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要使用试剂
            2.1.3 实验使用主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 脓毒症急性肝损伤模型建立
            2.2.2 标本的收集
            2.2.3 血清ALT和 AST的测定
            2.2.4 ELISA法检测血清炎症因子表达
            2.2.5 肝组织病理HE染色流程
            2.2.6 RT-PCR测定Gas
            2.2.7 肝脏氧化应激水平分析
            2.2.8 统计分析
    3 实验结果
        3.1 动物一般状态
        3.2 肝功能相关指标
        3.3 炎症因子水平
        3.4 病理组织改变
        3.5 脓毒症急性肝损伤肝组织中Gas6表达情况
        3.6 脓毒症急性肝损伤氧化应激水平分析
    4 讨论
    5 结论
第二部分 在脓毒症急性肝损伤中重组小鼠Gas6的肝脏保护作用研究
    1 前言
    2 实验材料与方法
        2.1 实验材料与试剂
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 实验仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 动物模型制备、分组及处理
            2.2.2 肝脏损伤标记物测定
            2.2.3 ELISA法检测血清炎症因子表达
            2.2.4 RT-PCR法检测血清炎症因子表达
            2.2.5 肝组织病理HE染色流程
            2.2.6 MPO测定
    3 实验结果
        3.1 rmGas6对小鼠一般状态及肝功能影响
        3.2 rmGas6对脓毒症急性肝损伤模型小鼠的炎症因子指标的影响
        3.3 肝脏组织病理改变
        3.4 脓毒症急性肝损伤氧化应激水平分析
    4 讨论
    5 结论
第三部分 重组小鼠Gas6对脓毒症急性肝损伤肝脏凋亡的影响及保护机制研究
    1.前言
    2.实验材料与方法
        2.1 实验材料与试剂
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 实验仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 实验动物分组
            2.2.2 western blot检测
            2.2.3 RT-PCR检测凋亡相关指标m RNA表达
            2.2.4 TUNEL染色
    3 实验结果
        3.1 凋亡相关指标变化
        3.2 NF-κB相关指标
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性自我评价
参考文献
附录 综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3735095