HucMSC来源的外泌体转运miR-373和Let-7b缓解肝纤维化

发布时间：2023-02-06 11:13

　　目的:肝纤维化是肝硬化和肝癌前期必经的病理过程,其特征为肝星状细胞（hepatic stellate call,HSC）活化导致细胞外基质（extracellular matrix,ECM）过度沉积。前期研究发现人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cell,hucMSC）来源的外泌体（hucMSC derived exosome,hucMSC-ex）可修复小鼠肝纤维化,但具体的机制尚不明确。microRNA（mi RNA）是非编码单链小RNA,参与基因的转录后调控,在肝纤维化进程中发挥关键作用。本研究旨在探讨hucMSC-ex转运miR-373和Let-7b修复肝纤维化的作用及机制,为肝纤维化的治疗提供新的手段。方法:1)采用miRNeasy serum/plasma kit提取健康人和肝纤维化患者血清exosome以及健康小鼠和肝纤维小鼠肝组织及血清exosome中的mi RNA,采用定量PCR检测两组血清exosome和组织中miR-373的表达。2)过表达或敲减肝星状细胞（LX-2）中miR-373,通过定量PCR、We... 

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词中英文注释表
第一章 绪论
    1.1 间充质干细胞
        1.1.1 间充质干细胞生物学特性
        1.1.2 MSC与组织修复
        1.1.3 MSC来源外泌体的生物学特征
    1.2 MSC与肝纤维化
        1.2.1 肝纤维化的发病机制
        1.2.2 MSC与肝纤维化
        1.2.3 MSC-ex与肝纤维化
    1.3 miRNA在肝纤维化治疗中的作用
        1.3.1 miRNA的生物学特性
        1.3.2 miRNA与肝脏疾病
        1.3.3 miR-373与Let-7b
    1.4 研究目的、方法、技术路线和意义
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究方法
        1.4.3 技术路线
        1.4.4 研究意义
第二章 HucMSC-ex转运miR-373缓解肝纤维化
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 细胞株
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要的仪器及相关耗材
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠肝纤维化模型建立
        2.2.2 HucMSC-ex的分离与鉴定
        2.2.3 细胞转染miR-373mimics/inhibitor
        2.2.4 HucMSC-ex处理活化的LX-2细胞
        2.2.5 细胞和组织蛋白提取
        2.2.6 Westernblot
        2.2.7 RNA提取
        2.2.8 RNA逆转录
        2.2.9 荧光定量PCR
        2.2.10 细胞免疫荧光
        2.2.11 HucMSC-ex移植治疗小鼠肝纤维化
        2.2.12 HE、Masson和SiriusRed染色
        2.2.13 免疫组织化学法
        2.2.14 激光共聚焦显微镜观察exosome细胞内定位
        2.2.15 标记的HucMSC-ex进行动物活体成像
        2.2.16 血清exosome及其miRNAs的提取
        2.2.17 双荧光素酶报告基因
        2.2.18 可溶性胶原的检测
        2.2.19 常温孵育法与超声法
        2.2.20 统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 miR-373与肝纤维化密切相关
        2.3.2 miR-373抑制LX-2细胞的胶原合成
        2.3.3 miR-373调控肝星状细胞的TGF-βR2表达
        2.3.4 HucMSC-ex改善肝纤维化
        2.3.5 HucMSC-ex-miR-373调控TGF-βR2表达和胶原合成
        2.3.6 miR-373修饰的hucMSC-ex促进肝纤维化修复
    2.4 讨论
第三章 HucMSC-ex转运Let-7b缓解肝纤维化
    3.1 材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 细胞株
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要的仪器及相关耗材
    3.2
        3.2.1 小鼠肝纤维化模型建立、HucMSC-ex移植治疗
        3.2.2 RNA的提取、逆转录、荧光定量PCR
        3.2.3 细胞蛋白提取、Westernblot
        3.2.4 免疫组织化学法
        3.2.5 细胞免疫荧光
    3.3 结果
        3.3.1 HucMSC-ex调控TGF-βR
        3.3.2 HucMSC-ex通过Let-7b调控TGF-βR1,抑制肝纤维化
    3.4 讨论
第四章 总结与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文及参加会议
    一、发表论文
    二、参加会议
    三、获奖情况



本文编号：3735893