幽门螺杆菌与胃粘膜上皮细胞相互作用关系的研究
发布时间：2023-03-19 05:41
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H．pylori)是在1983年发现的一种螺杆状的革兰氏阴性微需氧菌。它可在人胃粘膜上皮细胞定植数十年，引起多种消化系统疾病，如：慢性胃炎，消化性溃疡等。最近的流行病学研究表明：幽门螺杆菌感染与胃癌、胃粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤(MALT)的发生密切相关。WHO已将该菌列为Ⅰ类致癌因子。但目前关于H．pylori感染导致胃癌发生的分子机制还不清楚。 CagA蛋白是由H．pylori分泌的一种重要的毒力因子，它是由cagA基因编码的一个120-145kDa的蛋白质。目前认为cagA阳性菌株比cagA阴性菌株有更大的毒性，并增加了胃癌的发病率。当cagA阳性菌株感染人胃粘膜上皮细胞后，就会将CagA蛋白通过Ⅳ型分泌系统注射到胃粘膜上皮细胞内，进入细胞内的CagA蛋白定位在质膜内表面，一方面可以在Src家族蛋白酪氨酸激酶的作用下，其C末端的EPIYA模序中的酪氨酸残基发生磷酸化修饰，磷酸化的CagA蛋白可与SHP-2中的SH2结构域结合，并激活SHP-2的磷酸酶活性，激活的SHP-2可以参与MAPK／MEK／ERK途径，这一途径的异常...
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
符号说明
文献综述
一.幽门螺杆菌及其毒力因子CagA的研究进展
二.肿瘤抑制基因Runx3的主要研究进展
三.幽门螺杆菌及其球形体的研究进展
第一部分 幽门螺杆菌CagA对Runx3基因表达的调控
1.实验材料
1.1 主要试剂和药品
1.2 主要仪器
2.实验方法
2.1 GES-1细胞的培养
2.2 细胞转染
2.3 质粒DNA的转化,提取及酶切鉴定
2.4 RNA的提取
2.5 RT-PCR检测
2.6 Western blot检测
3.实验结果
3.1 WT-CagA/pcDNA3.1与PR-CagA/pcDNA3.1质粒的酶切鉴定
3.2 WT-CagA/pcDNA3.1及PR-CagA/peDNA3.1转染GES-1细胞后CagA蛋白的表达
3.3 RT-PCR分析幽门螺杆菌WT-CagA对Runx3基因转录的调控
3.4 WT-CagA在蛋白水平对Runx3基因表达的调控
3.5 RT-PCR分析PR-CagA对Runx3基因转录的调控
3.6 PR-CagA在蛋白水平对Runx3基因表达调控
3.7 RT-PCR分析WT-CagA对CyclinD1及Bim基因转录的调控
3.8 WT-CagA在蛋白水平对CyclinD1基因表达的调控
4.讨论
第二部分 幽门螺杆菌CagA调节Runx3表达的分子机制研究
1.实验材料
1.1 主要试剂和药品
1.2 主要仪器
2.实验方法
2.1 GES-1细胞的培养
2.2 甲基化特异PCR检测
2.3 Runx3启动子荧光素酶报告质粒载体的构建
2.4 荧光素酶报道基因重组质粒的转染
2.5 双荧光素酶活性检测
3.实验结果
3.1 甲基化特异PCR结果
3.2 PCR扩增Runx3基因5’上游1150bp启动子片段及其T克隆鉴定
3.3 pGL3-1150bp启动子质粒的鉴定及测序
3.4 pGL3-1150bp启动子转染GES-1细胞及双荧光素酶活性测定
4.讨论
第一、二部分总结
第三部分 幽门螺杆菌及其球形体感染胃粘膜上皮细胞后的基因表达谱的研究
1.实验材料
1.1 主要试剂和药品
1.2 主要仪器
2.实验方法
2.1 GES-1细胞的培养
2.2 幽门螺杆菌的培养及球形体的诱导
2.3 GES-1细胞与幽门螺杆菌的共培养
2.4 扫描电镜观察幽门螺杆菌及其球形体与GES-1细胞的粘附
2.5 流式细胞术检测细胞凋亡
2.6 RNA的提取
2.7 cDNA微阵列分析
2.8 RT-PCR检测
3.实验结果
3.1 扫描电镜观察到的幽门螺杆菌与GES-1细胞的粘附情况
3.2 流式细胞术检测细胞凋亡结果
3.3 所提取RNA的质量控制
3.4 cDNA微阵列结果
3.5 RT-PCR结果
4.讨论
第三部分总结
参考文献
致谢
博士在读期间发表的论文目录
学位论文评阅及答辩情况表
外文论文
本文编号：3764674
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
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中文摘要
英文摘要
符号说明
文献综述
一.幽门螺杆菌及其毒力因子CagA的研究进展
二.肿瘤抑制基因Runx3的主要研究进展
三.幽门螺杆菌及其球形体的研究进展
第一部分 幽门螺杆菌CagA对Runx3基因表达的调控
1.实验材料
1.1 主要试剂和药品
1.2 主要仪器
2.实验方法
2.1 GES-1细胞的培养
2.2 细胞转染
2.3 质粒DNA的转化,提取及酶切鉴定
2.4 RNA的提取
2.5 RT-PCR检测
2.6 Western blot检测
3.实验结果
3.1 WT-CagA/pcDNA3.1与PR-CagA/pcDNA3.1质粒的酶切鉴定
3.2 WT-CagA/pcDNA3.1及PR-CagA/peDNA3.1转染GES-1细胞后CagA蛋白的表达
3.3 RT-PCR分析幽门螺杆菌WT-CagA对Runx3基因转录的调控
3.4 WT-CagA在蛋白水平对Runx3基因表达的调控
3.5 RT-PCR分析PR-CagA对Runx3基因转录的调控
3.6 PR-CagA在蛋白水平对Runx3基因表达调控
3.7 RT-PCR分析WT-CagA对CyclinD1及Bim基因转录的调控
3.8 WT-CagA在蛋白水平对CyclinD1基因表达的调控
4.讨论
第二部分 幽门螺杆菌CagA调节Runx3表达的分子机制研究
1.实验材料
1.1 主要试剂和药品
1.2 主要仪器
2.实验方法
2.1 GES-1细胞的培养
2.2 甲基化特异PCR检测
2.3 Runx3启动子荧光素酶报告质粒载体的构建
2.4 荧光素酶报道基因重组质粒的转染
2.5 双荧光素酶活性检测
3.实验结果
3.1 甲基化特异PCR结果
3.2 PCR扩增Runx3基因5’上游1150bp启动子片段及其T克隆鉴定
3.3 pGL3-1150bp启动子质粒的鉴定及测序
3.4 pGL3-1150bp启动子转染GES-1细胞及双荧光素酶活性测定
4.讨论
第一、二部分总结
第三部分 幽门螺杆菌及其球形体感染胃粘膜上皮细胞后的基因表达谱的研究
1.实验材料
1.1 主要试剂和药品
1.2 主要仪器
2.实验方法
2.1 GES-1细胞的培养
2.2 幽门螺杆菌的培养及球形体的诱导
2.3 GES-1细胞与幽门螺杆菌的共培养
2.4 扫描电镜观察幽门螺杆菌及其球形体与GES-1细胞的粘附
2.5 流式细胞术检测细胞凋亡
2.6 RNA的提取
2.7 cDNA微阵列分析
2.8 RT-PCR检测
3.实验结果
3.1 扫描电镜观察到的幽门螺杆菌与GES-1细胞的粘附情况
3.2 流式细胞术检测细胞凋亡结果
3.3 所提取RNA的质量控制
3.4 cDNA微阵列结果
3.5 RT-PCR结果
4.讨论
第三部分总结
参考文献
致谢
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外文论文
本文编号：3764674
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3764674.html
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