电穿孔介导的kallistatin基因表达及对小鼠IBD模型的预防治疗作用

发布时间：2023-04-01 19:59

　　炎症性肠病(IBD)是一种天然免疫性疾病。目前其发病机理尚不明确,临床上尚无有效的治疗药物。Kallistatin(Kal)是一种血管生成抑制剂和肝素结合蛋白,其在生理和病理反应中有多种作用,如抗炎、抗血管生成等,被认为是肠炎、关节炎、损伤修复的候选药物。 本实验首先通过对两种质粒的酶切鉴定,X-gal染色法和细胞免疫荧光法验证了pAAV-LacZ质粒和pAAV-Kal质粒,及对细胞转染鉴定了Kal可在细胞内表达。并利用电穿孔法将基因导入昆明小鼠体内,比较其与非电穿孔法介导的基因表达差异。同时检测电穿孔介导的Kal在不同转染浓度、不同时间的表达情况,并绘制不同转染浓度下的表达曲线。使用电穿孔法介导Kal对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠IBD模型进行基因预防治疗,通过检测小鼠的体重变化、存活率、以及病理切片分析Kal对其治疗效果。并通过组织免疫荧光法初步探讨Kal在小鼠结肠炎中的抗炎机制。 研究结果显示电穿孔介导Kal基因表达可以剂量依赖性的降低IBD模型的炎症反应。结肠病理切片分析显示,Kal可以降低单核细胞的侵袭,同时利用免疫荧光发现Kal多集中于炎症区,我们推测这可能说明Kal...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 Kallistatin 的研究进展
        1.1.1 Kallistatin 的特性及结构活性关系
        1.1.2 Kallistatin 的分布及调节
        1.1.3 Kallistatin 的功能
        1.1.4 总结及展望
    1.2 炎症性肠病机制研究进展
        1.2.1 肠道微生物的“两面性”
        1.2.2 保持肠道内平衡路径的研究
        1.2.3 炎性体研究（Inflammsome）
        1.2.4 NOD2 的研究
        1.2.5 天然免疫、结肠炎和组织修复
    1.3 活体电穿孔的研究进展
        1.3.1 活体电穿孔的的原理和特点
        1.3.2 影响活体电穿孔效率的因素
        1.3.3 活体电穿孔在不同组织上的应用
        1.3.4 活体电穿孔与核酸免疫
        1.3.5 活体电穿孔与基因治疗
        1.3.6 展望
第二章 pAAV-Kal 及pAAV-LacZ质粒的细胞内表达
    2.1 实验材料、试剂与仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 主要实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 主要试剂配制
        2.2.2 pAAV-Kal 及pAAV-LacZ 质粒的转化及鉴定
        2.2.3 质粒的大量提取、纯化及浓度测定
        2.2.4 细胞培养
        2.2.5 质粒表达鉴定
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 pAAV-LacZ 及pAAV-Kal 酶切鉴定
        2.3.2 pAAV-LacZ 及pAAV-Kal 在细胞内表达
        2.3.3 小结
第三章 电穿孔介导pAAV-Kal 及pAAV-LacZ质粒在小鼠体内的表达
    3.1 实验材料、试剂与仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 主要实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 主要试剂配制
        3.2.2 活体电穿孔法介导LacZ 质粒在小鼠体内的表达
        3.2.3 活体电穿孔法转导pAAV-Kal 质粒在小鼠体内的表达
        3.2.4 实验数据分析
    3.3 实验结果及分析
        3.3.1 活体电穿孔法介导LacZ 质粒在小鼠体内的表达
        3.3.2 活体电穿孔法介导pAAV-Kal 质粒在小鼠体内的表达
    3.4 讨论
第四章 Kal 对小鼠结肠炎的预防治疗作用
    4.1 实验材料、试剂与仪器
        4.1.1 实验材料及仪器
        4.1.2 实验试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 主要试剂配制
        4.2.2 动物模型建立及给药
        4.2.3 Kal 对肠炎小鼠预防作用
        4.2.4 数据分析
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 小鼠体重变化及死亡率
        4.3.2 模型小鼠结肠长度变化
        4.3.3 小鼠结肠组织病理切片及免疫荧光分析
    4.4 讨论
结论
论文创新点
发表论文及参加会议情况
参考文献
致谢



本文编号：3777773