miR-200a在酒精性肝病中通过靶向ZEB2调控肝细胞凋亡

发布时间：2023-04-03 18:53

　　背景:我国是肝病大国,随着人们生活水平的提高,酒精在生活中的滥用,酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)的发病率也迅速增加。在我国,酒精性肝病在饮酒人群中的发病率高达6.18%。近年来,越来越多的研究着眼于micro RNA在酒精性肝病中对脂质代谢、凋亡、炎症等过程的微观调控作用。micro RNA是一类长度为18-24个核苷酸的非编码小RNA,虽然不能编码蛋白质,但是可以通过靶向靶基因m RNA的3’UTR区的碱基对来调控下游基因的表达。已有大量文献报道了mi R-200a在肝纤维化,肝癌中具有重要的调控作用,但其在酒精性肝病中的角色尚未被定义。探讨mi R-200a在酒精性肝病中的作用及其作用机制,是防治酒精性肝病的重要方法之一。E盒锌指结合蛋白(ZEB)1和2在上皮细胞向间质细胞转化分化过程中抑制E-cadherin的表达,诱导上皮间质转化(EMT),EMT的异常激活是肿瘤发生发展的重要因素。ZEB2在细胞凋亡过程中发挥重要作用,但其在酒精性肝病中的作用尚不明确。有研究发现micro RNA200家族与ZEB2有着密切联系。本课题组拟以酒精饲养小鼠模...

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

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1.前言
2.实验材料
    2.1 实验动物
    2.2 实验细胞
    2.3 实验试剂
    2.4 主要仪器
    2.5 溶剂和试剂配制
3.试验方法
    3.1 动物模型建立
    3.2 HE染色
    3.3 组织免疫荧光单染
    3.4 组织TUNEL染色
    3.5 细胞培养和处理
    3.6 MTT试验
    3.7 细胞凋亡检测(AnnexinV-FITC/PI双染法)
    3.8 血清谷丙转氨酶(ALT)含量测定(微板法)
    3.9 血清谷草转氨酶(AST)含量测定(微板法)
    3.10 细胞总RNA的提取与浓度检测
    3.11 cDNA合成
    3.12 RT-qPCR
    3.13 WesternBlot
        3.13.1 蛋白提取
        3.13.2 蛋白定量
        3.13.3 SDS-PAGE电泳
        3.13.4 湿转
        3.13.5 抗原抗体反应及显色
    3.14 细胞转染
        3.14.1 siRNA转染实验
        3.14.2 质粒提取与转染
    3.15 统计学处理
4.实验结果
    4.1 酒精性肝病小鼠模型的建立
    4.2 miR-200a在小鼠原代肝细胞中表达变化
    4.3 乙醇刺激AML-12细胞浓度探索及miR-200a体外表达变化.
    4.4 miR-200a在小鼠体内对肝细胞凋亡的影响
    4.5 miR-200a对AML-12细胞凋亡的影响
    4.6 miR-200a与ZEB2的靶向关系
    4.7 ZEB2对AML-12细胞凋亡的影响
    4.8 miR-200amimics与ZEB2过表达质粒共转染对AML-12细胞凋亡的影响
5.讨论
6.结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3780957