两种海马多肽对酒精诱导HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2023-04-04 01:24

　　过量饮酒会引起广泛的肝脏疾病,如脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌。特别是酒精性肝病(alcoholic live disease,ALD),已引起广泛关注。本文以来源于海马的两种多肽为实验原料,考察了两种海马多肽的活性,研究了SHP-1(VSIADSKA,Val-Ser-Ile-Ala-Asp-Ser-Lys-Ala)和SHP-2(ENANGP,Glu-Asn-Ala-Asn-Gly-Pro)对人肝癌细胞(HepG2)酒精性损伤的保护作用及其机制,为海马多肽在ALD的预防和治疗中提供了理论基础。主要研究内容及结果如下:1、采用MTT实验测定细胞活力。实验结果表明,酒精的最佳作用浓度为0.75 M;在10-100μM浓度范围内,两种多肽对细胞均无毒害作用;与酒精损伤组(对照组)相比,在10-100μM时,细胞相对活力明显增强,且呈浓度依赖性。这说明两种海马多肽对酒精诱导的HepG2细胞损伤均具有保护作用。2、采用DCFH-DA法检测细胞内ROS的含量。实验结果表明,与对照组相比,两种海马多肽都减少了细胞内ROS的含量,即海马多肽可有效抑制ROS的生成。3、采用SOD、GSH和GGT检测...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
1 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 酒精性肝病
        1.1.2 氧化应激
        1.1.3 细胞凋亡
        1.1.4 抗氧化剂
    1.2 海马的研究
        1.2.1 海马的介绍
        1.2.2 海马的主要化学成分
        1.2.3 海马的药理活性
    1.3 技术路线
    1.4 研究目的和意义
2 两种海马多肽对酒精诱导的HEPG2 细胞损伤的保护作用
    2.1 实验材料与仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 仪器与设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 酒精浓度筛选
        2.2.3 样品毒性实验
        2.2.4 海马多肽对酒精诱导HepG2 细胞损伤的保护作用
        2.2.5 数据处理
    2.3 结果与分析
        2.3.1 酒精浓度对HepG2 细胞活力的影响
        2.3.2 海马多肽对细胞活力的影响
        2.3.3 海马多肽对酒精诱导HepG2 细胞损伤的保护作用
    2.4 讨论
3 两种海马多肽对酒精诱导HEPG2 细胞产生氧化应激损伤的保护作用
    3.1 实验材料与仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验仪器
        3.1.4 主要溶液配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 HepG2 细胞内ROS的测定
        3.2.2 HepG2 细胞内SOD含量的测定
        3.2.3 HepG2 细胞内GSH含量的测定
        3.2.4 HepG2 细胞内GGT含量的测定
        3.2.5 Western blot检测HepG2 细胞内SOD、GSH和 GGT蛋白的表达情况
        3.2.6 数据处理
    3.3 结果与分析
        3.3.1 海马多肽对HepG2 细胞内ROS含量的影响
        3.3.2 海马多肽对HepG2 细胞内SOD含量的影响
        3.3.3 海马多肽对HepG2 细胞内GSH含量的影响
        3.3.4 海马多肽对HepG2 细胞内GGT含量的影响
        3.3.5 海马多肽对HepG2 细胞内SOD、GSH和 GGT蛋白表达的影响
    3.4 讨论
4 两种海马多肽对HEPG2 细胞凋亡通路的调控
    4.1 实验材料与仪器
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验仪器
        4.1.4 主要溶液配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 海马多肽对细胞形态的影响
        4.2.2 Western blot实验检测细胞内与凋亡相关的蛋白的表达情况
        4.2.3 海马多肽对Akt和 NF-κB信号通路的影响
        4.2.4 免疫荧光法检测海马多肽对HepG2 细胞内p65 蛋白入核的影响
        4.2.5 海马多肽对MAPK信号通路的影响
        4.2.6 荧光显微镜检测细胞内线粒体膜电位的变化情况
        4.2.7 彗星实验
        4.2.8 酶联免疫法检测细胞内TNF-α含量的变化情况
        4.2.9 数据处理
    4.3 结果与分析
        4.3.1 形态学观察海马多肽对细胞凋亡的影响
        4.3.2 海马多肽对细胞内与凋亡相关的蛋白的影响
        4.3.3 海马多肽对Akt和 NF-κB信号通路的影响
        4.3.4 海马多肽对细胞内p65 蛋白入核的影响
        4.3.5 海马多肽对MAPK信号通路的影响
        4.3.6 海马多肽对细胞内线粒体膜电位的影响
        4.3.7 彗星实验
        4.3.8 海马多肽对细胞内TNF-α含量的影响
    4.4 讨论
5 结论
参考文献
致谢
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本文编号：3781517