RhoA/ROCK信号通路在TGF-β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞转分化中的作用

发布时间：2023-04-05 12:12

　　目的:探讨RhoA/ROCK信号通路在TGF-β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)转分化中的作用。 方法:(1)采用腹腔注射胰蛋白酶法,分离培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,经倒置相差显微镜和免疫组织化学染色(Immunohistochemistry,IHC)鉴定;(2)常规传代,取第二代腹膜间皮细胞用于实验,培养的细胞静止24h后,随机分为正常对照组和TGF-β1(10ng/ml)刺激组两组,分别用半定量RT-PCR、Western Blot和间接免疫荧光(Immunofluorescence,IF)法观察不同时间α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),E-钙黏蛋白(E-cadherin)、胶原Ⅰ(CollagenⅠ)、波形蛋白(Vimentin)以及RhoA(包括总RhoA及活化的RhoA)mRNA和/或蛋白的表达;(3)取第二代融合后的腹膜间皮细胞,静止24h后随机分为以下4组:正常对照组,TGF-β1(10ng/ml)刺激组,TGF-β1(10ng/ml)+Y-27632(ROCK特异性抑制剂,10μM)组,Y-27632(10μM)组,分别用半定量RT-PCR、Western Bl...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词简表
第一章 前言
第二章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 动物及来源
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 大鼠原代腹膜间皮细胞的分离与培养
        2.2.2 细胞传代
        2.2.3 免疫组织化学方法鉴定腹膜间皮细胞
        2.2.4 腹膜间皮细胞的活力测定
        2.2.5 腹膜间皮细胞增殖实验
        2.2.6 实验分组
        2.2.7 RT-PCR检测
        2.2.8 Western Blot
        2.2.9 膜蛋白的提取
        2.2.10 间接免疫荧光检测E-cadherin、α-SMA和CollagenⅠ的表达
    2.3 统计学处理
第三章 实验结果
    3.1 大鼠原代腹膜间皮细胞的鉴定
    3.2 大鼠原代腹膜间皮细胞活力测定
    3.3 大鼠原代腹膜间皮细胞增殖实验结果
    3.4 RNA的检测
    3.5 TGF-β1诱导大鼠腹膜间皮细胞RhoA活化
    3.6 TGF-β1对大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响
        3.6.1 RPMCs形态改变
        3.6.2 TGF-β1对E-cadherin表达的影响
        3.6.3 TGF-β1对α-SMA表达的影响
        3.6.4 TGF-β1对Vimentin蛋白表达的影响
        3.6.5 TGF-β1对CollagenⅠ表达的影响
    3.7 Y-27632对大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响
        3.7.1 E-cadherin的表达
        3.7.2 α-SMA的表达
        3.7.3 Vimentin蛋白的表达
        3.7.4 CollagenⅠ的表达
第四章 讨论
    4.1 腹膜间皮细胞转分化
    4.2 RhoA/ROCK信号通路影响腹膜纤维化的可能机制
第五章 结论
参考文献
综述
致谢
攻读学位期间的主要研究成果



本文编号：3783391