Si-RNA和过表达慢病毒载体转染大鼠肝星状细胞SUMO-1表达的影响

发布时间：2023-04-07 22:34

　　肝纤维化（hepatic fibrosis,HF）是一组非常常见的慢性肝疾病的病理学综合征。在整个肝纤维化的发生发展过程中，肝细胞内会发现许多基因的发生异常表达，并增加发展为肝细胞性癌的危险性。在肝纤维化的发生过程中，肝星状细胞（hepatic stellate cells, HSCs）的活化增殖是其中的一个重要环节。肝星状细胞位于窦周Disse间隙内，在正常状态下，HSC主要储存和代谢维生素A，合成与分泌少量的细胞外基质（extracellular matrix,ECM）。当HSC受刺激过度激活时，转变成具有增生活性的、产生纤维的具收缩特性的肌成纤维细胞并表达α平滑肌肌动蛋白（Alpha smooth muscle actin，α-SMA）合成异常增多的ECM超过肝清除能力导致其在肝内聚集是肝纤维化形成的重要机制。有研究表明适当浓度的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)可刺激HSC，使其提高增殖率和表达细胞内胶原增强。LPS诱导的细胞模型能够较好地模拟出肝纤维化形成过程中HSC在数量和功能方面的主要改变，为HSC活化的研究提供了一个较为全面的细胞模型。 小泛素相关修...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 不同浓度 LPS 刺激 HSC-T6 SUMO-1 的表达水平变化
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.0 器材的灭菌和去 RNA 酶
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 相关液体的配制
        2.2.3 实验分组及细胞处理
        2.2.4 real-time PCR 检测 SUMO-1 mRNA 表达
        2.2.5 Western blot 检测各组织蛋白的表达
        2.2.6 统计学处理
    2.3 结果
        2.3.1 Real time-PCR 结果
        2.3.2 Western blot 检测结果
    2.4 讨论
第3章 SUMO-1 表达变化后对 HSC-T6 增殖的影响及其机制研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 器材的灭菌和去 RNA 酶
        3.2.2 细胞培养
        3.2.3 慢病毒载体的构建
        3.2.4 慢病毒转染 HSC-T619
        3.2.5 利用定量 PCR 检测转染沉默、过表达 SUMO-1 以及各对照组慢病毒后的 SUMO-1 表达水平
        3.2.6 利用 Western blot 实验检测各组蛋白的表达水平
        3.2.7 利用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡
        3.2.8 统计学处理
    3.3 结果
        3.3.1 荧光定量 PCR 结果分析
        3.3.2 Western blot 结果分析
        3.3.3 流式细胞仪检测结果
        3.3.4 小结
        3.3.5 在干扰 SUMO-1 表达水平的情况下 SUMO-2 及 SUMO-3 的变化
    3.4 讨论
第4章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3785459