新型多肽AWRK6改善非酒精性脂肪肝的作用及机制研究

发布时间：2023-04-08 21:38

　　目的:非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是与胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)密切相关的肝损伤性疾病,已成为目前全球最常见的慢性肝病,也是世界公共健康问题之一。研究表明,改善胰岛素抵抗可有效缓解NAFLD。AWRK6是实验室从东北林蛙皮肤分泌物中鉴定并改造的18个氨基酸的阳离子多肽,具有提高机体的胰岛素敏感性,缓解胰岛素抵抗,改善小鼠2型糖尿病等多种功能。本研究拟对AWRK6改善NAFLD的作用进行分析,并进一步对其作用机制进行探究,为NAFLD的治疗提供新策略。方法:利用油酸(OA)诱导HepG2肝细胞内甘油三酯(TG)积累,构建具有NAFLD病征的体外细胞模型。使用MTT法检测细胞存活率,分析细胞内TG含量变化,优化确定AWRK6最佳作用条件(5×10-8 mol/L,4 h),并以5×10-8mol/L AWRK6干预油酸诱导模型细胞4 h,检测细胞内TG含量,在细胞水平评估AWRK6改善NAFLD的作用。同时利用高脂饲料饲养小鼠12周,构建NAFLD小鼠模型,建模成功后将小鼠随机分为NC组(普通...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 概述
    1.2 NAFLD治疗药物研究现状
        1.2.1 非肽类药物
        1.2.2 肽类药物
    1.3 NAFLD致病机制
        1.3.1 NAFLD致病机制相关学说
        1.3.2 NAFLD相关信号通路
    1.4 NAFLD临床前模型构建
    1.5 研究目的及意义
第2章 脂质积累细胞模型建立及AWRK6作用条件优化
    2.1 引言
    2.2 实验材料和仪器
        2.2.1 实验细胞
        2.2.2 实验材料
        2.2.3 实验仪器
        2.2.4 实验试剂的配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 脂质积累细胞模型的建立
        2.3.3 AWRK6处理最佳条件的筛选
        2.3.4 AWRK6 对脂质积累细胞内TG含量的影响
        2.3.5 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 脂质积累细胞模型建立
        2.4.2 AWRK6作用浓度及时间的确定
        2.4.3 Exendin-4 作用浓度的确定
        2.4.4 AWRK6 对细胞内TG含量影响
    2.5 讨论
第3章 AWRK6改善小鼠非酒精性脂肪肝
    3.1 引言
    3.2 实验材料和仪器
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 实验材料
        3.2.3 实验仪器
        3.2.4 实验试剂的配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 NAFLD小鼠模型建立
        3.3.2 分组及给药
        3.3.3 空腹血糖测定
        3.3.4 生理生化指标测定
        3.3.5 小鼠肝脏处理、HE染色和油红O染色
        3.3.6 统计学分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 NAFLD小鼠模型建立
        3.4.2 AWRK6 降低NAFLD小鼠体重
        3.4.3 AWRK6影响肝脏形态、降低肝脏重量和系数
        3.4.4 AWRK6 改善NAFLD小鼠的胰岛素抵抗
        3.4.5 AWRK6 改善NAFLD小鼠血清生化指标
        3.4.6 AWRK6 抑制NAFLD小鼠肝脏病变和脂质积累
    3.5 讨论
第4章 AWRK6 通过AMPK/ACC信号通路改善NAFLD
    4.1 引言
    4.2 实验材料和仪器
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验仪器
        4.2.3 实验试剂的配制
    4.3 实验方法
        4.3.1 细胞处理及给药
        4.3.2 细胞蛋白提取
        4.3.3 组织蛋白提取
        4.3.4 Western blot
        4.3.5 统计学分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 AWRK6对Hep G2 细胞内蛋白的影响
        4.4.2 AWRK6对小鼠肝脏中蛋白的影响
    4.5 讨论
结论
致谢
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况



本文编号：3786517