高脂饮食促进小鼠结肠炎的机理及维生素D及其类似物的抑制作用的研究

发布时间：2023-04-11 23:48

　　目的:炎症性肠病(inflammatory bowel diseases,IBD)的发病机制与肠上皮屏障破坏有关。研究表明,肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在IBD患者结肠组织中表达显著升高,可通过激活肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)通路破坏结肠上皮紧密连接结构,进而加重结肠上皮屏障的破坏。高脂食物的摄入是加重IBD发生的一个重要因素。前期研究报导,高脂饮食通过破坏结肠上皮屏障加重IBD病理发展。高脂饮食也可增加TNF-α以及NADPH氧化酶的表达进而促进活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成。然而,高脂饮食在IBD病理发展中的具体作用机制仍有待进一步阐明。流行病学研究发现,维生素D摄入不足是IBD发生、发展的潜在危险因素。给予IBD模型小鼠维生素D类似物帕立骨化醇(Paricalcitol,PAL)处理可有效抑制MLCK通路活化,抑制结肠上皮屏障的破坏。然而高脂环境下维生素D对IBD病理发展的作用机制研究甚少。因此,本研究旨在揭示高脂饮食加重IBD病理发展的潜在机...

【文章页数】：94 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略语
第一部分 :高脂饮食诱导小鼠结肠氧化应激破坏结肠上皮屏障
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 仪器与试剂
            2.1.1 主要材料与试剂
            2.1.2 主要仪器与器材
        2.2 实验方法与步骤
            2.2.1 动物模型建立
            2.2.2 血糖测定
            2.2.3 血浆FFA测定
            2.2.4 血浆甘油三酯和胆固醇测定
            2.2.5 结肠甘油三酯和胆固醇测定
            2.2.6 H&E染色
            2.2.7 免疫荧光染色
            2.2.8 尤斯灌流实验
            2.2.9 FITC右旋糖酐渗透性实验
            2.2.10 蛋白浓度测定
            2.2.11 Western blot实验
            2.2.12 Real-time PCR实验
            2.2.13 TEM实验
            2.2.14 ROS测定
        2.3 统计分析
    3 结果
        3.1 1周高脂饮食对小鼠结肠炎症状影响不明显
        3.2 4周高脂小鼠模型建立
        3.3 4周高脂饮食加重小鼠结肠炎症状
        3.4 高脂加重小鼠结肠上皮屏障的破坏
        3.5 高脂增加小鼠结肠氧化应激
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :维生素D类似物抑制高脂小鼠结肠上皮屏障的破坏
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 仪器与试剂
            2.1.1 主要材料与试剂
            2.1.2 主要仪器与器材
        2.2 实验方法与步骤
            2.2.1 动物模型建立
            2.2.2 H&E染色
            2.2.3 FITC右旋糖酐渗透性实验
            2.2.4 蛋白浓度测定
            2.2.5 Western blot实验
            2.2.6 Real-time PCR实验
        2.3 统计分析
    3 结果
        3.1 高脂饮食降低小鼠结肠上皮VDR表达
        3.2 PAL减轻高脂小鼠结肠炎症状
        3.3 PAL抑制高脂小鼠结肠上皮屏障的破坏
        3.4 PAL抑制高脂小鼠结肠氧化应激
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :高脂加重细胞氧化应激破坏结肠上皮细胞屏障以及维生素D抑制高脂环境下结肠上皮细胞屏障的破坏
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 仪器与试剂
            2.1.1 主要材料与试剂
            2.1.2 主要仪器与器材
        2.2 实验方法与步骤
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 培养基配置
            2.2.3 细胞给药及分组
            2.2.4 蛋白浓度测定
            2.2.5 Western blot实验
            2.2.6 ROS活性测定
            2.2.7 免疫荧光染色
            2.2.8 细胞跨上皮电阻实验
            2.2.9 细胞线粒体跨膜电位实验
        2.3 统计分析
    3 结果
        3.1 高脂加重结肠上皮细胞屏障的破坏
        3.2 高脂加重结肠上皮细胞氧化应激
        3.3 ROS抑制剂减轻结肠上皮细胞屏障的破坏
        3.4 维生素D抑制高脂环境下结肠上皮细胞氧化应激
        3.5 维生素D抑制高脂环境下结肠上皮细胞屏障的破坏
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3789997