胃蛋白酶ssDNA适配子的筛选鉴定

发布时间：2023-04-20 22:42

　　胃出血是常见的危重消化道疾病,由于胃出血点所处环境特殊,强酸性的胃液和高活性的胃蛋白酶使凝血酶无法发挥作用,因此,抑制胃蛋白酶活性为治疗该类疾病的关键;此外,胃出血患者血清中的胃蛋白酶含量远高于正常人,用特异性的结合物检测血清胃蛋白酶变化,亦是临床无痛诊断胃出血疾病的有效手段。核酸类适配子为一些具有高级结构的单链DNA或RNA的寡核苷酸链,因其性质稳定、以高特异性和高亲和力与靶物质结合,目前已在临床上用于诊断和治疗各种疾病。本文旨在利用指数富集配基系统的进化技术(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX),将与磁珠偶联的胃蛋白酶作为靶分子,从体外80 nt(nucleotide)的随机寡核苷酸(DNA)文库中,筛选鉴定出与胃蛋白酶特异性结合的适配子:然后将适配子上标记生物素分子,建立胃蛋白酶的ELADA(Enzyme-linked aptamer direct assay)检测方法;并筛选出抑制胃蛋白酶功能位点适配子,为胃出血症的临床诊断和应用奠定基础。研究结果如下:1.将1mg/mL胃蛋白酶包被于D...

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摘要
ABSTRAST
英文缩略词表( Abbreviations)
一. 文献综述
    1 胃蛋白酶
    2 核酸适配子
        2.1 核酸适配子结构
    3 核酸适配子的筛选
        3.1 SELEX技术的基本步骤
        3.2 SELEX技术的发展
    4 核酸适配子的应用与发展
        4.1 核酸适配子的优势
        4.2 核酸适配子的应用
        4.3 核酸适配子发展
        4.4 核酸适配子的展望
    5 论文研究的目的及意义
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 实验方法
    1.3 数据统计
2 实验结果
    2.1 寡聚核苷酸文库及dsDNA位置确定
    2.2 对称PCR扩增反应条件优化
    2.3 不对称PCR扩增反应条件优化
    2.4 磁珠偶联胃蛋白酶
    2.5 各轮筛选参数
    2.6 ssDNA富集库与胃蛋白酶的结合率
    2.7 质粒抽提结果
    2.8 一级结构同源性分析
    2.9 二级结构构建
    2.10 适配子对胃蛋白酶比活力的影响
    2.11 适配子对胃蛋白酶的结合特异性鉴定
3 讨论
4 总结与展望
参考文献
在学期间发表的学术论文与研究结果
致谢



本文编号：3795301