BALB/c小鼠肝脏原代Kupffer细胞分离纯化方法的改良研究

发布时间：2023-04-22 20:01

　　目的:利用低速离心和差速贴壁的特性,探讨一种高效的BALB/c小鼠原代Kupffer细胞(Kupffer cells,KC)分离纯化方法,为进一步研究KC在肝脏疾病中的作用奠定良好的基础。方法:0.1%IV型胶原蛋白酶分阶段(原位灌注和水浴振荡)消化肝脏组织形成单细胞悬液,低速离心肝脏单细胞悬液初步分离KC,结合差速贴壁培养进一步纯化KC;本方法与传统的密度梯度法比较分离的KC数量和细胞活性;应用F4/80免疫荧光染色鉴定本法提取细胞的形态学特征、流式细胞术检测提取细胞分子标志物(F4/80)的表达、墨汁吞噬实验进行KC吞噬功能鉴定;构建KC缺氧/复氧模型,流式细胞术检测主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ、CD40、CD68和CD86的表达,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:单只BALB/c小鼠用传统的Percoll密度梯度法可获得(2.19±0.43)×106个KC,细胞存活率(90.2±3.7)%。单只BALB/c小鼠肝脏用本法可获得(5.83±0.54)×106个KC,细胞存活率达(92.3±2.7)%,在提取数量上本法显著优于传统的Percoll密度梯度法;...

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前言
1 材料与方法
2 结果
3 讨论
全文总结
参考文献
文献综述
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致谢
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本文编号：3798313