树突状细胞及其Toll样受体3在重型乙型肝炎中的作用研究

发布时间：2023-04-24 22:07

　　DC是专职的抗原提呈细胞,是连接天然免疫与获得性免疫的桥梁,是平衡免疫应答与免疫耐受的关键。作为免疫系统的前沿哨兵,受到病原体或炎症信号的刺激后,DCs进行复杂的成熟过程,从而影响免疫应答的质与量。本研究旨在观察重型乙型肝炎(ACLF)患者外周血树突状细胞两个亚群(mDC和pDC)的频率,单核细胞衍生的树突状细胞(MoDC)表型及刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力的变化。 筛选重型乙型肝炎(ACLF)患者60例,慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者40例,并以20例健康者作对照,取入选研究对象的抗凝全血,应用流式细胞术检测外周血循环中mDC和pDC分别占外周血单个核细胞(PBMC)的比例。抗凝全血通过淋巴细胞分离液进行密度梯度法离心,分出PBMC,并进一步经免疫磁珠阳性选择的方法分离单核细胞,细胞因子白介素4和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子体外诱导为MoDC,经poly(I:C)刺激后,用流式细胞仪检测MoDC的表型(HLA-DR、CD83、CD80、CD86),并通过同种混合淋巴细胞反应(MLR)检测MoDC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。 1、健康对照组mDC和pDC占PBMC百分率分别为0...

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

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目录
缩略词表
摘要
ABSTRACT
前言
    1、重型乙型肝炎发病机制的现状研究
    2、树突状细胞与模式识别受体
    3、Toll样受体
    4、科研设想
    5、研究的目的及意义
第一部分 重型乙型肝炎患者外周血树突状细胞频率、表型、功能变化
    一、引言
    二、材料与方法
        1 基本临床材料
        2 仪器与试剂
        3 检测外周血中mDC和pDC的比例
        4 外周血单个核细胞(PBMC)的分离
        5 细胞磁性分离系统分离单核细胞和CD4+T细胞
        6 流式细胞术验证检测分离的单核细胞及CD4+T细胞
        7 单核细胞体外诱导分化为树突状细胞
        8 流式细胞术检测MoDC表面分子的表达
        9 混合淋巴细胞反应
        10 统计学方法
    三、结果
        1 基本临床资料
        2 mDC和pDC数量的变化
        3 单核细胞衍生的DC(MoDC)形态特点
        4 MoDC的细胞表型鉴定分析
        5 MoDC刺激T细胞增殖能力
    四、讨论
    五、小结
第二部分 重型乙型肝炎患者外周血树突状细胞TLR3信号通路的变化研究
    一、引言
    二、材料与方法
        1 临床资料
        2 仪器与试剂
        3 单核细胞衍生的树突状细胞(MoDC)体外诱导培养
        4 流式细胞仪检测MoDC上TLR3的表达
        5 总RNA提取
        6 cDNA第一链的合成
        7 实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)
        8 琼脂糖凝胶电泳
        9 免疫印迹法(Western blotting)测定TLR3的表达量
        10 液相蛋白流式检测
        11 ELISA检测DCs培养上清液中IFN-β的表达水平
        12 统计学方法
    三、结果
        1 DC上TLR3的表达
        2 TLR3信号通路上关键转录因子的表达
        3 MoDC分泌促炎性因子水平
        4 MoDC分泌IFN-β水平
    四、讨论
    五、小结
全文总结
    结论
    创新点
    研究展望
正文参考文献
综述
综述参考文献
后记
    在读期间撰写於发表的论文
    参与国际会议交流
    在读期间获奖情况
    致谢



本文编号：3800109