渥曼青霉素对LPS/D-GalN诱导急性肝损伤中肝组织坏死、凋亡及自噬的影响

发布时间：2023-04-27 21:11

　　目的众所周知,肠道是大体最大的“储菌所”,在人体肠道内寄生着500-1000种共计100万亿个细菌(这些细菌影响着人的消化能力和免疫功能,对人体的健康非常重要)。其中的革兰氏阴性菌死亡的时候会释放内毒素,因此肠道也是人体最大的“内毒素库”。由肠源性内毒素引发的急性肝损伤是临床上导致肝脏功能衰竭的常见原因之一。LPS作为内毒素的主要成分,通过腹腔注射到小鼠体内,能够很好的模拟肠源性内毒素发生感染的过程,而D-GalN能够特异性的消耗肝脏内的UTP,从而抑制相应的核酸、蛋白质等物质的合成,最终导致肝细胞的损伤甚至死亡。LPS与D-GalN的联合注射能够特异性的造成肝脏的暴发性衰竭,是研究急性肝损伤的很好的动物模型。自噬是一种在所有真核细胞中都稳定存在的,以一种双分子膜包裹着细胞质成分成为自噬体,随后这些结构和溶酶体融合,递送的“货物”被降解和回收的过程,是对发育、分化、生存以及稳态起重要作用的胞内途径。在过去的十多年中,其在人类疾病中的作用被广泛关注。最近数据表明自噬参与多种肝脏疾病的发生。然而关于自噬在急性肝损伤中的作用的报道却很少而且结果也不一致。渥曼青霉素是一种自绳状青霉中分离出来的...

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符号说明
前言
    一、内毒素(LPS)的生物学作用
    二、肠源性内毒素与肝损伤
    三、自噬与肝损伤
    四、渥曼青霉素和肝损伤
    五、脂多糖/D-半乳糖胺诱导的小鼠急性肝损伤模型和研究目的
材料
    一、实验动物
    二、RT-PCR试剂
    三、Western blot试剂
    四、免疫组织化学/荧光染色试剂
    五、其它试剂及主要耗材
    六、实验仪器
方法
    一、内毒素诱导小鼠急性肝损伤动物模型的建立
    二、血清的采集及肝功能的测定
    三、血清中炎性因子的流式测定
    四、酶联免疫吸附实验(ELISA)
    五、免疫组织化学(IHC)染色实验
    六、苏木素伊红(HE)染色
    七、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色
    八、免疫组织荧光(IF)染色实验
    九、RT-PCR实验
    十、免疫蛋白印迹(Western blot)实验
    十一、一步法提取组织的蛋白质、RNA、DNA
    十二、数据的统计学分析
结果
    一、脂多糖/D-半乳糖胺诱导小鼠的急性肝损伤,造成肝组织的坏死和凋亡
    二、在脂多糖/D-半乳糖胺导致小鼠急性肝损伤过程中肝组织中自噬水平升高
    三、在脂多糖/D-半乳糖胺诱导的小鼠急性肝损伤中炎性细胞因子分泌增加
    四、渥曼青霉素预处理能够减轻脂多糖/D-半乳糖胺诱导的小鼠急性肝损伤过程中肝脏的损伤程度,抑制炎性细胞因子的分泌
    五、渥曼青霉素预处理能够抑制脂多糖/D-半乳糖胺诱导的小鼠急性肝损伤过程中肝组织自噬水平的升高
    六、渥曼青霉素预处理能够抑制脂多糖/D-半乳糖胺诱导的小鼠急性肝损伤过程中肝组织内MAPK和NF-κB通路的活化
讨论
小结
附图表
参考文献
致谢
攻读硕学位期间发表论文及编著目录
附件



本文编号：3803071