乙型肝炎病毒主S蛋白相互作用蛋白—醛缩酶B验证及功能研究

发布时间：2023-05-07 05:27

　　目的:证实醛缩酶B作为乙型肝炎病毒主S蛋白结合蛋白一种候选蛋白,探讨醛缩酶B生物学功能。 方法:(1)以人HEPG2细胞RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出ALDOB基因。将PCR产物克隆进真核载体PCMV5内,构建含ALDOB基因的重组真核表达质粒。以实验室重组全S质粒为模板,利用PCR扩增主S蛋白基因,构建PCMV4-Flag-主S基因表达质粒,分别将重组质粒转染293FT细胞,用免疫荧光和Western blot等方法检测ALDOB及主S在293FT细胞中的表达。(2)将两种质粒共转293T细胞,激光共聚焦试验明确主S蛋白和醛缩酶B空间定位。将主S基因表达质粒稳转HepG2细胞,构建主S稳转株,通过免疫共沉淀方法,验证主S蛋白与醛缩酶B相互结合。(3)构建靶向醛缩酶B重组干扰质粒siALDOB-Pu6,导入HEPG2细胞中,筛选出干扰质粒的稳转株。通过细胞增殖实验、Transwell实验、细胞凋亡实验,探讨ALDOB在肝癌细胞HepG2生长、侵袭、凋亡等方面的作用。 结果:(1)核酸序列分析的结果表明,克隆的ALDOB基因与主S基因在GenBank中分别与已登记基因序列100%...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英文缩略词表
中文摘要
英文摘要
前言
材料与试剂
实验方法
实验结果
讨论
结论
参考文献
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3810366